TGF-β1诱导培养后ACC-M细胞上皮间质转化及肿瘤干细胞相关标记表达的动态观察

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目的结合上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)与肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSCs)学说,初步研究EMT是否能使涎腺腺样囊性癌细胞的干细胞相关标记的表达产生变化,并讨论其意义。方法(1) TGF-β1诱导培养ACC-M细胞发生EMT的形态学动态观察:体外培养涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC-M,经TGF-β1诱导后连续观察其细胞形态的变化;(2)TGF-β1诱导培养后ACC-M细胞EMT及CSCs相关标记物表达的变化:实验分两组,实验组ACC-M细胞培养时加入TGF-β1使其浓度达到10g/ml,对照组加入等量PBS液;流式细胞术检测培养0h、24h、48h后ACC-M细胞的EMT相关标记物E-cad、N-cad、vimentin,以及肿瘤干细胞相关标记物0ct-4的表达情况;实验结果经SPSS11.0软件统计,采用重复测量数据方差分析中的广义线性模型(General Linear Model,GLM)进行数据分析。结果1.在体外培养中,经TGF-β1诱导的ACC-M细胞形态发生了明显的变化,由最初的紧密排列的多边形,变成了松散、杂乱的梭形。2.E-cad实验组与对照组的表达不满足球形对称,校正自由度后两组差别具有统计学意义(P<0.05),各时间点之间差别有统计学意义(P<0.001),且时间与分组存在交互效应,即培养时间越长,TGF-β1的作用越明显(P<0.05);N-cad实验组与对照组的表达满足球形对称,两组差别具有统计学意义(P<0.05),各时间点之间差别有统计学意义(P<0.001),且时间与分组存在交互效应(P<0.05);vimentin实验组与对照组的表达满足球形对称,两组差别具有统计学意义(P<0.05),各时间点之间差别有统计学意义(P<0.001),且时间与分组存在交互效应(P<0.05);3. Oct-4实验组与对照组的表达不满足球形对称,校正自由度后两组差别具有统计学意义(P<0.05),各时间点之间差别有统计学意义(P<0.001),且时间与分组存在交互效应(P<0.05)结论1.TGF-β1能够使涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC-M发生形态学上的EMT变化;2.TGF-β1能够上调间质细胞表面标记N-cad.vimentin的表达,下调上皮细胞表面标记E-cad的表达;3.TGF-β1能够下调转录因子0ct-4的表达,可能参与调节肿瘤干细胞中细胞亚群的比例。
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