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目的：在体外培养Raw264.7细胞系,用RANKL诱导其分化为破骨细胞,加入不同剂量的OPG,观察对破骨细胞内生成的NO及eNOS活性的影响。方法：实验分四步进行,第一步：Raw264.7细胞的体外培养,加入50ng/ml的RANKL诱导分化成破骨细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒(TRAP染色试剂盒),验证诱导生成的破骨细胞,即TRAP染色细胞被染成酒红色且细胞核≥3个的即为破骨细胞。第二步：将诱导生成的破骨细胞分成6个组,接种到24孔培养板,每组设3个复孔,其中A组为空白对照组；B组为阴性对照组,加入培养液；实验组分为C,D,E,F组；C组加入10ng/ml OPG, D组加入25ng/ml OPQE组加入50ng/ml OPG,F组加入75ng/ml OPG;继续培养,再用TRAP染色计数被染成酒红色并且细胞核大于等于3个的破骨细胞数量,用以检测骨保护素抑制破骨细胞分化生成的作用；采用碘化丙啶插入DNA定量染色法测定破骨细胞凋亡率验证OPG诱导破骨细胞凋亡的作用；Real time PCR检测破骨细胞标志基因TRAPmRNA及蛋白激酶K mRNA的表达量。第三步：NO检测试剂盒检测各组中破骨细胞生成的NO浓度；内皮细胞型一氧化氮合酶(e NOS)活力试剂盒检测各组破骨细胞中e NOS的活力。第四步：A组继续作空白对照,B组为阴性对照组,加入培养液；C组,D组,E组,F组中加入50umol/L的内皮细胞型一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME),继续培养,采用碘化丙啶插入DNA定量染色法测定破骨细胞凋亡率;Real time PCR检测加入L-NAME后,OPG对破骨细胞标志基因TRAP mRNA及蛋白激酶K mRNA表达量的影响.结果：(1)随着OPG浓度的增加,破骨细胞的生成数量逐渐减少,凋亡率逐渐增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。(2)随着OPG浓度升高,破骨细胞内生成的NO逐渐增加；破骨细胞内e NOS的活性呈现出先升高后降低的趋势；实验组NO浓度及eNOS活性与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。(3)随着OPG浓度的升高,破骨细胞特异性标记酶TRAP mRNA和蛋白激酶K mRNA的表达量逐渐减少；而加入e NOS抑制剂后两种特异性酶mRNA的表达量较未加入抑制剂前增加,破骨细胞的凋亡率也较未加入e NOS抑制剂前降低。结论：(1)骨保护素可以抑制破骨细胞的分化生成并诱导其凋亡。(2)在实验浓度范围内随着骨保护素浓度升高,破骨细胞内NO的生成增加；而破骨细胞内e NOS的活性呈现先增加后降低的趋势。(3)在实验浓度范围内骨保护素与NO在抑制破骨细胞生成及促进其凋亡方面有协同作用。