论文部分内容阅读
目的:
观察蜂胶水提液(Water Extract Propolis,WEP)对血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导体外培养的人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth musclecell, HUASMC)增殖作用的影响,并探讨其作用机制,为蜂胶抗动脉粥样硬化的作用提供理论依据。
方法:
1.组织贴块法培养HUASMC;
2.分组:培养的HUASMC随机分为4组
对照组:不加入任何药物;
模型组:加入100nmol/L的AngⅡ作用24h;
蜂胶组:分别给予50mg/L、100mg/L、200mg/L的WEP预孵育2h后加入100nmol/L的AngⅡ作用24h;
氯沙坦组:1.5umol/L的氯沙坦预孵育2h后加入100nmol/L的AngⅡ作用24h。
3.采取细胞计数法检测HUASMC数量;
4.利用流式细胞仪(flow cytometry, FCM)分析技术检测细胞周期;
5.通过免疫细胞化学法观察增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的表达:
6.采用分光光度计检测培养液中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)及丙二醛(Maleic dialdehyde, MDA)的含量;
7.用TUNEL染色法检测细胞凋亡。
结果:
1.WEP对细胞计数的影响;
模型组细胞计数高于对照组和氯沙坦组(P<0.01),100mg/L和200mg/L蜂胶组低于模型组(P<0.01);50mg/L和100mg/L蜂胶组高于氯沙坦组(P<0.01),200mg/L蜂胶组与氯沙坦组没有统计学差异(P>0.05)。
2.WEP对G<,0>/G<,1>期细胞百分比的影响:
模型组G<,0>/G<,1>期细胞百分比低于对照组、氯沙坦组(P<0.01);100mg/L和200mg/L蜂胶组高于模型组(P<0.01):50mg/L蜂胶组低于氯沙坦组(P<0.05),100mg/L、200mg/L蜂胶组与氯沙坦组无统计学差异(P>0.05)。
3.WEP对PCNA表达的影响:
模型组PCNA阳性率高于对照组、氯沙坦组(P<0.01):100mg/L和200mg/L蜂胶组低于模型组(P<0.01),蜂胶各浓度组与氯沙坦组无统计学差异(P>0.05)。
4.WEP对总SOD活力的影响:
模型组总SOD活力低于对照组(P<0.01),也低于氯沙坦组(P<0.05);蜂胶各浓度组总SOD活力升高,较模型组、对照组和氯沙坦组差异显著(P<0.01)。
5.WEP对MDA含量的影响:
模型组MDA含量高于对照组、氯沙坦组(P<0.01);蜂胶各浓度组低于模型组(P<0.01);100mg/L、200mg/L蜂胶组低于氯沙坦组(P<0.01)。
6.WEP对凋亡指数(apoptosis index,AI)的影响:
模型组AI高于对照组、氯沙坦组(P<0.01);100mg/L和200mg/L蜂胶组低于模型组(P<0.01);50mg/L蜂胶组高于氯沙坦组(P<0.01),100mg/L和200mg/L蜂胶组与氯沙坦组无统计学差异(P>0.05)。
结论
1.Ang II可诱导体外培养的HUASMC增殖;氯沙坦具有拮抗Ang II增殖的作用;
2.一定浓度的WEP能抑制AngII诱导的HUASMC增殖;200mgWEP的作用效果与1.5umol/1氯沙坦基本相当。
3.WEP抑制Ang II诱导的HUASMC增殖的机制可能与WEP影响细胞增殖周期、抑制PCNA的表达、提高HUASMC抗氧化能力有关。
4.蜂胶能调控细胞增殖与细胞凋亡的平衡。