由葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaVs)引起的葡萄卷叶病在我国葡萄产地发生普遍,染病葡萄产量明显下降,品质降低,严重影响着葡萄产业的发展。近年来在一些作物上通过导入病毒外壳蛋白(CP)基因成功获得抗病毒材料,这种策略为这类病害的防治开辟了新的途径。本研究通过构建GLRaV-2 CP基因的植物表达载体,采用叶盘法通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EHA105转化本氏烟(Nicotiana benthamiana),得到了转化GLRaV-2 CP基因的植株。主要研究结果如下:1、构建了GLRaV-2 CP基因正义链的植物表达载体:在引物5′端设计了XbaⅠ,3′端设计了SmaⅠ酶切位点,合成新的引物CP2-F/CP2-R重新扩增GLRaV-2 CP基因,然后将GLRaV-2 CP基因连接植物表达载体pCAMBIA1301S,转化E.coli菌株DH10B感受态细胞,经过PCR和双酶切(XbaⅠ和SmaⅠ)筛选阳性克隆,成功构建了GLRaV-2 CP基因正义链植物表达载体。2、成功将GLRaV-2 CP基因转化了烟草:将pCAMBIA1301S质粒和成功构建的GLRaV-2 CP基因正义链植物表达载体质粒及本实验室前期获得的GLRaV-2 CP基因反义链植物表达载体质粒转化根癌农杆菌菌株EHA105感受态细胞,采用农杆菌介导的叶盘法转化本氏烟叶盘。通过共培养、选择诱导培养和生根培养,获得119株转化植株,其中转GLRaV-2 CP基因正义链58株,转GLRaV-2 CP基因反义链35株,转pCAMBIA1301S质粒26株,幼芽分化率达80%以上。采用CTAB法小量提取转基因植株的总DNA,利用相应的特异引物进行PCR鉴定,结果检测阳性率均在80%以上。3、建立了转基因烟草扩繁、生根和移栽体系。采用叶盘法,分别对GLRaV-2CP基因、pCAMBIA1301S质粒和本实验室前期获得的GLRaV-2 RdRp基因的转化植株进行幼芽扩繁,结果每个叶盘可平均分化出幼芽近50个。将分化的幼芽再转入3种生根培养基上进行诱导生根培养,结果表明MS+IBA 0.1mg/L培养基的生根效果最佳,生根率达100%。将生根的植株移栽到温室内的花盆中,移栽成活率均在70%以上。