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目的：构建含有canstatin基因的分泌型表达重组质粒并转染肝癌HepG2细胞,观察表达产物对体外培养肝癌细胞迁移能力和调亡的影响。方法：实验分为三部分。第一部分为含有canstatin重组质粒的构建,包括：1. Canstatin基因从胎盘组织中获取,RT-PCR扩增Canstatin cDNA及切胶回收并纯化,酶切pcDNA3. 1(-)-3flag载体质粒后,采用DNA定向连接技术构建含有canstatin的重组质粒pcDNA3. 1(-)-3flag/canstatin;2. pcDNA3. 1(-)-3flag/canstatin重组质粒转化感受态大肠杆菌DH5α；3.重组质粒的扩增及提取质粒DNA；4.质粒DNA经酶切鉴定及筛选后阳性质粒制成甘油菌送往公司测序；第二部分为pcDNA3.1(-)-3flag/canstatin重组质粒DNA转染至肝癌HepG2细胞及mRNA和蛋白水平表达的鉴定,包括：1.脂质体法共转染肝癌HepG2细胞,G418筛选稳定转染的肝癌HepG2细胞；2.实时定量PCR检测并比较canstatin在稳转后的肝癌HepG2细胞的表达;3. Western blot检测重组质粒转染后肝癌HepG2细胞的上清液中canstatin蛋白的表达；4.收集含有canstatin的重组质粒稳定转染后的肝癌HepG2细胞的上清液；第三部分为cantatin蛋白对体外培养的肝癌HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响的检测,包括：1.实验分组：空质粒转染的上清液组,重组质粒转染表达的上清液组,稳转后肝癌HepG2细胞组,未转染肝癌HepG2细胞组(空白对照组)；2.各组作用于培养的肝癌HepG2细胞；3.流式细胞仪检测凋亡细胞、凋亡率；4. Trance well小室和划痕实验测定转染细胞对重组基底膜的迁移能力。。结果：1.于胎盘组织获得684bp人canstatin基因,测序证明canstatin cDNA编码序列与基因库中登录的中国人canstatin序列比较,符合率百分之百。构建的分泌型真核表达载体pcDNA3. 1(-)-3flag/canstatin经酶切可得到5000bp和700bp两个条带,与pcDNA3. 1(-)-3flag载体质粒5400bp和canstatin684bp相符合。2.将构建好的重组质粒pcDNA3. 1(-)-3f lag/canstatin转染肝癌HepG2细胞并用400μg/mlG418浓度筛选得到可以稳定传代的转染肝癌HepG2细胞,RT-PCR证实质粒pcDNA3.1(-)-3flag/canstatin已成功转染进入肝癌HepG2细胞,实时定量PCR结果显示转染后基因拷贝数为842128, Western blot检测转染后的细胞裂解液和上清液,在SDS-PAGE凝胶上均得到一条约26KD的新蛋白,与canstatin蛋白大小相接近。3.重组质粒转染后的细胞上清液作用的肝癌HepG2细胞组和转染后肝癌HepG2细胞组的凋亡率(分别为15.50±0.77和13.33±0.92)明显高于空质粒转染的细胞上清液作用组和正常培养的未转染组的凋亡率(分别为0.48±0.05和0.36±0.09)p<0.01,并且重组质粒转染后的细胞上清液作用组的凋亡率也高于稳定转染后肝癌HepG2细胞组的凋亡率(p<0.01)；而以上各组细胞24h和48h的迁移率之间都没有统计学的差异(p>0.05)。结论：1.成功购建重组质粒pcDNA3. 1(-)-3flag/canstatin;2. pcDNA3. 1-Canstatin-3Flag重组质粒经脂质体法转染到肝癌HepG2细胞获得了canstatin基因在m RNA水平表达,并且细胞培养的上清液获得了canstatin蛋白表达。3.转染了pcDNA3.1-Canstatin-3Flag重组质粒的肝癌HepG2细胞的上清液促进了体外培养的肝癌HepG2细胞的凋亡,而对肝癌HepG2细胞的迁移没有影响。