论文部分内容阅读
目的1.系统评价补肾疏肝中药治疗卵巢储备功能减退的疗效及安全性,为中医药治疗卵巢储备功能减退提供循证学依据。2.探讨加减归肾丸对VCD所致卵巢储备功能减退小鼠卵巢组织形态学变化、血清激素水平及PI3K/AKT/mTOR信号通路表达水平的影响。方法1.计算机检索中国知网、万方、维普、PubMed、Cochrane Library数据库,检索时限为建库—2019年12月1日,收集补肾疏肝中药治疗DOR的随机对照试验,主要结局指标:AMH、FSH、AFC;次要结局指标:LH、E2、总有效率、中医症状评分、OVA、不良反应发生率,根据纳入标准和排除标准筛选文献、提取资料,采取“偏倚风险评估工具”进行质量评价,运用RevMan5.3软件对结局指标进行荟萃分析。2.将90只ICR雌性小鼠随机分成空白对照组、模型组、西药组(戊酸雌二醇)、加减归肾丸低、中、高剂量组,每组15只。用VCD建立卵巢储备功能减退小鼠模型,予以相应药物灌胃30天,第31天取血,HE染色观察卵巢组织形态学变化,酶联免疫法检测血清AMH、FSH、LH、E2水平,Western Blot法检测小鼠卵巢组织中PI3K、AKT、mTOR蛋白表达水平达,实时荧光定量PCR检测其mRNA表达水平。结果1.本研究共纳入20篇文献,共计1399例患者,Meta分析显示:补肾疏肝法治疗肾虚肝郁型DOR患者的AMH、AFC、E2水平及临床有效率,试验组高于对照组,FSH、LH水平、中医症状评分及药物不良反应发生率,试验组低于对照组,差异有统计学意义,而OVA无明显差异;说明补肾疏肝中药可以改善卵巢功能。而根据其干预措施,对其进行亚组分析,结果发现,补肾疏肝中药对比单用西药,临床有效率,试验组高于对照组,不良反应发生率,试验组低于对照组,但在AMH、AFC、E2、FSH、中医症状评分方面疗效相当;补肾疏肝中药联合西药对比单用西药,AMH、AFC、E2、OVA及临床有效率试验组高于对照组,FSH、LH、中医症状评分,试验组低于对照组;补肾疏肝中药对比空白组,AMH,AFC,试验组高于对照组,FSH、中医症状评分,试验组低于对照组,在E2方面疗效相当。2.动物实验:HE染色结果显示空白对照组卵巢组织内卵泡数量丰富,始基卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡轮廓清晰可见,并有大量黄体分布;模型组各级卵泡数量明显减少,闭锁卵泡明显增多,黄体数量稀少;西药组卵泡数量较为丰富,可见到较多黄体及少量闭锁卵泡及始基卵泡。加减归肾丸各剂量组中,高剂量组卵泡数量丰富,各级卵泡均可见到,黄体数量较多,可见到少量闭锁卵泡,其次为中剂量组,低剂量组主要以闭锁卵泡为主,可见少量黄体,且黄体形态不规则。与空白对照组比较,模型组小鼠血清FSH、LH显著升高(P<0.01),AMH、E2显著降低(P<0.01);与模型组相比,加减归肾丸中、高剂量组、西药组FSH、LH显著降低(P<0.01或P<0.05),AMH显著高于模型组(P<0.01),加减归肾丸高剂量组、西药组E2显著升高(P<0.01);与西药组相比,加减归肾丸低、中剂量组AMH、E2显著降低(P<0.01或P<0.05),FSH升高(P<0.05),加减归肾丸低剂量组LH显著升高(P<0.01);与低剂量组相比,加减归肾丸中剂量组AMH显著升高(P<0.01),FSH降低(P<0.05),加减归肾丸高剂量组FSH、LH降低(P<0.01或P<0.05),AMH、E2显著升高(P<0.01);与中剂量组相比,加减归肾丸高剂量组AMH、E2显著升高(P<0.01)。实时荧光定量PCR:与空白对照组比较,模型组小鼠PI3K、AKT、mTOR mRNA表达水平显著下降(P<0.01);与模型组相比,西药组、加减归肾丸高剂量组PI3K、AKT、mTOR mRNA表达水平显著升高(P<0.01),加减归肾丸低、中剂量组AKT、mTOR mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与西药组相比,加减归肾丸低、中剂量组PI3K、AKT、mTOR mRNA表达水平显著降低(P<0.01),加减归肾丸高剂量组PI3K、mTOR mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01),AKT mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与加减归肾丸低剂量组相比,加减归肾丸高剂量PI3K、AKT、mTOR mRNA表达水平显著升高(P<0.01),加减归肾丸中剂量组AKT、mTOR mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01);与加减归肾丸中剂量组相比,加减归肾丸高剂量PI3K、AKT、mTOR mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。Western Blot:与空白对照组比较,模型组PI3K、AKT、mTOR蛋白含量均降低(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,加减归肾丸中、高剂量组及西药组PI3K、AKT均较模型组升高(P<0.01);加减归肾丸中、高剂量组及西药组mTOR水平较模型组升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与西药组对比,加减归肾丸低剂量组PI3K、AKT水平降低(P<0.01),中剂量组PI3K水平降低(P<0.05);与低剂量组相比,加减归肾丸中剂量组PI3K水平升高(P<0.05),高剂量组PI3K、AKT水平升高(P<0.01或P<0.05);与中剂量组相比,加减归肾丸高剂量组PI3K水平升高(P<0.05)。结论:1.补肾疏肝中药治疗DOR有一定疗效,且不良反应发生率较西药低,安全性高,但由于纳入的文献方法学质量偏低,尚需要多中心、大样本、高质量的RCT加以验证。2.加减归肾丸能够增加VCD所致DOR小鼠卵巢内各级卵泡数量,减少闭锁卵泡,改善血清激素水平,还可能通过上调PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达水平,改善卵巢功能。