论文部分内容阅读
本论文首先确定了发酵液中L-谷氨酰胺的定性定量测定方法,然后应用代谢控制发酵原理,系统地研究了L-谷氨酰胺产生菌的选育,并确定了摇瓶发酵条件,主要研究内容和结果如下:(1)纸层析-分光光度计法测定发酵液中L-谷氨酰胺的含量。首先确立了展开剂为正丙醇:氨水(V/V)=5:2时,L-谷氨酰胺与L-谷氨酸之间的分离效果最好,二者之间无重叠现象。采用721分光光度计测定吸光度,最佳吸收波长选择在510 nm处有最大吸光度,对测定的准确性有利;洗脱时间为30 min时效果最佳;进一步对样品进行重复性试验、加标回收率试验,经反复试验,最终结果表明该方法重复性良好,回收率高,说明用此法测定L-谷氨酰胺含量具有较高的可靠性,为后续研究工作奠定了坚实的基础。(2)以嗜乙酰乙酸棒杆菌(Corynebacterium acetoacidophilum)YG13(MSOR)为出发菌株,采用UV、DES和NTG诱变处理,采用磺胺胍、硫酸铵两种药物平板,及分别以琥珀酸、L-谷氨酸为唯一碳源平板的定向筛选,最后获得一株L-谷氨酰胺产生菌YL012(MSOR,SGR,(NH4)2SO4R,SucG,L-GluG)。在未经优化的条件下发酵液中可积累L-谷氨酰胺34.3 g/L,比出发菌株产量提高了15.4 g/L。(3)通过对种子培养基的优化,及培养条件的研究,最后得出种子培养基的最佳组成为(g/L):葡萄糖25,硫酸铵5,KH2PO4 1,MgSO4·7H2O 0.5,玉米浆40,CaCO3 20;培养条件为:种子培养基初始pH为7.0,装液量定为250 mL三角瓶装40 mL种子培养基,30℃,100 r/min,培养9 h。通过对发酵培养基的优化,及培养条件的研究,最后得出摇瓶发酵培养基的最佳组成为(g/L):葡萄糖123.4,硫酸铵47.8,KH2PO4 1.0,MgSO4·7H2O 0.6,MnSO4·4H2O 0.005,FeSO4·7H2O 0.01,ZnSO4·7H2O 0.005,玉米浆4.3,CaCO3 30;最佳培养条件:发酵液培养基初始pH为7.5,接种量为8 %,装液量为250 mL三角瓶装15mL发酵培养基,30℃,100 r/min,培养72 h。产酸稳定在40.6 g/L,比未经优化提高了18 %。