新城疫(ND)是由新城疫病毒引起的禽的一种急性、烈性、高度接触性传染病,是危害养禽业的严重疫病之一。虽然灭活疫苗和弱毒疫苗在ND的预防和控制中发挥了重要作用,但也存在着保留部分毒性、引起呼吸道病变、难于区分疫苗免疫与自然感染免疫反应等缺陷。为此,新城疫基因工程疫苗的研究对ND的防治具有重要意义。但目前许多试验结果都表明,DNA疫苗无论在免疫效果与安全性方面,还是在接种途径及投递方法上都有待进一步改进,纳米粒黏膜免疫递送系统是运用可降解生物材料和纳米技术改进现有疫苗的剂型和投递方式,从而达到保护抗原、简化接种程序、减少给药次数、增强免疫效果的目的。本研究选用生物可降解材料PLGA为载体,以新城疫DNA (pVAX1-F (o))疫苗为模型药物,采用复乳化-溶剂挥发法制备新城疫DNA疫苗纳米粒,并对纳米粒的制备工艺及其影响因素、理化特性、生物活性、细胞毒性、免疫效果等进行了详细的研究。1、通过研究,确定了新城疫DNA疫苗PLGA纳米粒制备工艺的最优条件,即将200μg质粒溶液加入到含有40mg PLGA溶液中,50w超声功率下冰浴超声初乳30s,再加2mL浓度为2%的PVA复乳60s；得到的复乳液逐滴加入到0.5%PVA中进行固化并挥发多余的二氯甲烷,500r/min匀速搅拌5h；将固化液3000g 4℃离心15min,沉淀用ddH2O洗涤3次,以除去未包裹的质粒DNA和多余的PVA,真空冷冻干燥即得所需纳米粒；2、本试验制备所得的纳米粒形态规则、外形完整呈圆球形、表面光滑、分散性较好、包封率达到(91.8±0.3)%,纳米粒平均粒径为(433.5±7.5)nm,粒径分散度为0.41,Zeta电位为+2.7mV；3、体外抗DNaseⅠ降解试验结果表明,制备的纳米粒能保护质粒DNA抵抗核酸酶降解；4、体外释放试验结果表明,制得的纳米粒在体外释放是一次脉冲性突释后的一个连续缓释过程；5、间接免疫荧光试验和Western-blotting试验结果表明,本研究确定的纳米粒制备方法未破坏质粒DNA的生物学活性；6、细胞毒性试验表明,新城疫DNA疫苗纳米粒的毒性较小,构建的新城疫DNA疫苗PLGA纳米粒黏膜免疫递送系统具有较高的安全性；7、SPF鸡体内免疫试验结果表明,新城疫DNA疫苗PLGA纳米粒黏膜免疫比肌肉注射更能活跃地激活黏膜免疫应答部位,产生高水平的特异性IgG和IgA,说明纳米粒黏膜免疫递送系统不仅在黏膜局部产生免疫应答,还可引起全身性的体液免疫应答和细胞免疫应答。本试验成功地构建了新城疫DNA疫苗PLGA纳米粒黏膜免疫递送系统,并对其免疫效果进行了评价,同时为发展一种安全、高效并具有优良特性的基因载体提供了理论依据。新型纳米粒黏膜免疫递送系统可实现基因疫苗在体内的长效作用机制,从而达到增加给药途径、减少接种次数、提高药物在细胞内转运效率、增强免疫效果的目的；同时,本研究也可提高新城疫DNA疫苗在养禽业的实际应用,有效防治ND的发生,具有重大的理论和实际意义及广阔的应用前景。