1.目的本研究在中医药理论指导下,将中药地龙、黄芩、甘草进行有效部位提取,而制成龙芩草口含片。通过药学、药效学及其相关作用机制的研究,成分基本明确、药效可以肯定、质量能够控制,进而确定合理的制剂工艺,建立科学的质量控制标准;并通过口腔粘膜给药(龙芩草口含片),提高生物利用度,增进疗效。2.方法研究内容主要包括:龙芩草口含片的制剂工艺、龙芩草口含片的质量标准研究、龙芩草处方部分药效学研究、口腔粘膜毒性实验研究以及家兔体内血药浓度的测定。龙芩草组方由地龙、黄芩、甘草组成,结合病毒感染所致的流感、上呼吸道感染等症特点,遵循中医药理论配伍规律,经药理学筛选得到最佳处方,运用现代制药新技术,经高效提取分离有效部位制成经口腔粘膜给药制剂,具有清肺利咽,解毒泻热之功效。⑴龙芩草口含片制备工艺:地龙采用生物化学方法提取有效成分,黄芩依《中国药典》2005年版一部黄芩提取物项下要求、甘草依国家药品标准WS-10001(HD1269)-2002项下甘草酸单铵盐有关规定;用HPLC方法控制黄芩苷含量;依照口含片的制剂要求确定各步参数,从而确定制备工艺。⑵龙芩草口含片质量标准:采用薄层色谱法对方中黄芩、甘草、地龙进行定性鉴别,用HPLC方法对方中黄芩苷进行含量测定,确定制剂黄芩苷含量限度;并按《中国药典》附录制剂通则口含片项下规定制定检查项目。⑶龙芩草制剂药效学实验:采用大肠杆菌内毒素致日本大耳白家兔发热模型,观察龙芩草制剂的解热作用及其对TNF-α的影响;用小鼠氨水引咳法,观察龙芩草制剂对模型小鼠的镇咳功效;龙芩草口含片粘膜毒性实验,观察粘膜及内脏各项指标及制作病理切片。⑷龙芩草口含片家兔体内药代动力学实验:实验采用家兔经口腔粘膜给药与口服给药两种途径,分别在不同时间取血,测得相应时间点的血药浓度,比较两种给药途径的血药浓度,计算相对生物利用度;经雾化给药,剥离家兔口腔粘膜,测定粘膜内含药量情况。3.结果⑴龙芩草口含片制备工艺:用生物化学方法提取地龙有效成分,保证地龙中各种酶的活性;检测得到黄芩提取物中黄芩苷含量85.5%、甘草提取物中甘草酸单铵盐含量75%,均符合规定。⑵龙芩草口含片质量标准:确定了薄层色谱方法;规定了检查项目;制定了制剂黄芩苷含量限度,每75mg(每片)样品黄芩苷含量不低于5.0mg,实验方法学考察均符合要求。⑶龙芩草口含片药效学实验:对于脂多糖致家兔发热模型有显著的解热作用(P<0.01),且剂量增大时作用增强,实验显示脂多糖可刺激ATⅡ细胞分泌TNF-α,而龙芩草制剂能够抑制TNF-α的异常增加;龙芩草口含片中剂量组对氨水引咳的小鼠的咳嗽次数明显减少,并与空白组相比较,具有极显著差异(p<0.01),其他各组无明显改变(P>0.05);龙芩草口含片粘膜毒性实验显示:组织脏器均无明显病理变化,可以认为无毒。⑷龙芩草口含片家兔体内药代动力学实验:两种给药途径都大约在70min时血药浓度达峰值,且经口腔粘膜给药峰值时的血药浓度是灌胃给药的1.6倍,口腔给药相对于灌胃给药的相对生物利用度为166.5%;雾化给药后,口腔粘膜中测到含有黄芩苷成分。4.结论经提取地龙、黄芩、甘草有效部位,制成龙芩草口含片。龙芩草口含片具有清肺利咽,解毒泻热功效,用于病毒感染所致的流感,上呼吸道感染作用显著,经口腔粘膜给药,避免肝脏首过效应的影响,显著提高了生物利用度。