西兰花种子油的提取及抗氧化和抑制肿瘤细胞增殖的活性研究

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西兰花,又名青花椰菜,英文名为Broccoli,是属于十字花科植物的一种,根据国内外研究发现,西兰花中含有丰富的异硫氰酸盐等活性成分,具有较强的抗肿瘤作用,根据流行病学的研究表明,经常食用西兰花可以预防多种癌症的发生。除此之外,由于西兰花中还富含酚类等物质,具有较强的抗氧化活性。在对西兰花药用有效部位研究发现,西兰花种子是含有异硫氰酸盐类物质最为丰富的部位,虽然国内外有许多关于西兰花种子提取物的研究报道,但是有关从西兰花种子中提取油脂,对其抗氧化与抑制肿瘤细胞增殖的活性进行研究以及有关功能性油脂的开发方面还不够完善。本试验以西兰花种子为原料并从中提取西兰花种子油(broccoli seed oil,BSO)。通过溶剂浸提法,分析不同溶剂对BSO提取率的影响以及感官评价结果,结果显示在正己烷作为提取溶剂时,BSO的提取率较高,且所得到的油样气味良好,无异味产生,并且油脂也呈现澄清透明的状态。因此筛选正己烷作为后续试验的萃取溶剂;在此基础上进一步研究超声波辅助提取BSO的工艺条件,并对BSO进行精制,同时对其理化性质及脂肪酸组成进行分析。在活性方面,试验中对BSO的抗氧化活性以及抑制肿瘤细胞增殖的活性也进行了初步的研究。采用响应面的分析方法,在超声波辅助提取BSO的单因素试验基础上,结合Box-Behnken试验设计,选取超声功率、超声时间以及液料比为变量,以BSO的提取率为响应值,试验方差分析结果得出,超声功率、超声时间与液料比对BSO的提取率具有显著影响,且各因素对提取率影响大小的顺序是:超声时间>液料比>超声功率。建立回归方程,并考察各因素间的交互作用对BSO提取率的影响。使用Design-Expert软件对试验参数进行优化分析,确定BSO的最佳提取工艺参数为超声功率205 W,超声时间45 min,液料比8.5:1,此时BSO的提取率预测值为25.8399%,经验证后实际提取率为25.78%。对经过脱酸、脱胶后的BSO分析其理化性质和脂肪酸组成。结果表明,经过精制后的BSO,其碘值为102.85 g/100g,皂化值和酸值分别为178.36 mg KOH/g和酸值为0.97 mg KOH/g,过氧化值约为2.74 meq/kg。较于精制前,BSO的品质有明显改善,各项指标也均达到国家规定的食用植物油的要求。经过气相检测,BSO中主要包括2种饱和脂肪酸(棕榈酸和硬脂酸)以及3种不饱和脂肪酸(油酸、亚油酸与a-亚麻酸),并且不饱和脂肪酸的含量接近70%,其中a-亚麻酸的含量最高,为40.41%。采用不同的抗氧化检测方法,分析比较了 BSO同人工合成抗氧化剂TBHQ、BHT以及天然抗氧化剂VE的抗氧化活性。结果表明,西兰花种子油具有明显的抑制油脂氧化的作用,在诱导温度为90℃和100℃下,BSO对亚麻籽油的抑制作用近似于BHT和VE。同时对DPPH自由基、羟基自由基以及超氧阴离子自由基均具有不同程度的清除作用,其中以对羟基自由基的清除能力最强;另外西兰花种子油清除各项自由基的能力以及还原能力均优于VE,在进行还原力测定时,当BSO的浓度为12.5 mg/mL时,其吸光值达到最大值1.158,而VE的浓度为350 mg/mL时,其最大吸收值仅为0.915。在对西兰花种子油抗肿瘤作用的初步研究中,通过MTT法分析比较了 BSO对Hela细胞,人类肝癌细胞HepG2以及人类正常成纤维细胞HELF增殖的抑制作用,我们得出,在一定浓度下,西兰花种子油能有效地抑制Hela细胞以及HepG2细胞的增殖,其IC50值分别为21.5 mg/mL和29.66 mg/mL。通过对比人类正常细胞的抑制作用得出,在西兰花种子油浓度为10.0~20.0 mg/mL范围内,BSO样品组对HELF细胞的抑制率同DMSO对照组比较p<0.05,差异不显著。也就是说在BSO添加量小于20.0 mg/mL时,对人类正常纤维细胞基本无抑制作用,而在同等浓度下对Hela细胞的抑制率为41.5%,对HepG2的抑制率为41.4%,具有明显的抑制肿瘤细胞增殖作用。然而试验中有关抗肿瘤作用的指标还不够完善,有关其抗肿瘤作用的具体活性成分及机理仍不明确,有待进一步的验证。
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