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研究目的:探讨Foxm1、β-catenin、TCF4和VM在人食管鳞状细胞癌中的表达情况及其分子机制。研究方法:1.收集2012年1月-2015年12月,归档于蚌埠医学院第一附属医院病理科的石蜡包埋的人食管鳞状细胞癌组织共216例(术前均未进行放、化疗及免疫治疗等)和216例与其对应的癌旁正常食管黏膜组织。利用免疫组化ElivisionTMplus法及CD34+PAS套染检测石蜡包埋的人食管鳞状细胞组织中Foxm1、β-catenin、TCF4、E-cadherin蛋白的表达及VM形成情况,并分析Foxm1对VM及WNT/β-catenin信号传导通路的影响及其在食管癌中的临床病理意义。2.Western blotting蛋白质印迹法检测Foxm1蛋白在两种人食管癌Eca109和Ec9706细胞系中的表达。结果表明,Foxm1蛋白在Eca109细胞系中的表达明显高于在Ec9706细胞系,因此本次实验选择Eca109细胞系进行后续实验。采用瞬时转染技术将Foxm1-SiRNA干扰片段转染到Eca109细胞系中,并设立空白组、阴性组和Foxm1-SiRNA干扰组;CCK8实验检测三组细胞的增殖能力。Transwell实验检测三组细胞的迁移及侵袭能力。细胞划痕实验检测三组细胞的转移能力等。3.利用Western blotting蛋白质印迹法和RT-PCR方法来检测各实验组(空白组、阴性组、干扰组)中Foxm1、β-catenin、TCF4、E-cadherin等信号传导通路关键分子的蛋白和mRNA水平表达情况,并探讨它们之间的相互关系。4.体外三维培养(three dimensional culture,3D)观察人食管癌Eca109细胞,并置于倒置显微镜下察看各实验组(空白组、阴性组、干扰组)管状结构的形态及数量。研究结果:1.组织学实验:Foxm1、β-catenin、TCF4等因子在食管鳞状细胞癌组织中呈阳性表达,在对照组中呈阴性表达。而E-cadherin在食管鳞状细胞癌组织中低表达,在对照组中高表达,并且在肿瘤组织中可观察到VM结构的存在。2.与对照组相比,转染Foxm1-SiRNA干扰片段的食管癌细胞Eca109,其细胞的侵袭、迁移和转移能力均降低(P<0.001);β-catenin、TCF4蛋白的表达降低(P<0.001),而E-cadherin蛋白的表达升高。3.三维培养结果显示:与对照组相比,Foxm1-SiRNA组形成的网络样管状结构显著减少(P<0.001),而在空白组及阴性对照组间并没有明显的差别。研究结论:1.人食管鳞状细胞癌组织中存在VM的结构。2.干扰Foxm1基因表达后,可以减少人食管鳞状细胞癌Eca109细胞的侵袭、迁移和增殖能力,并阻止VM结构的形成。3.Foxm1可能是通过Wnt/β-catenin信号传导通路影响EMT过程的发生及VM结构的形成。