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本文以两个不同耐盐性苦荞麦品种及其新株系为实验材料,进行了耐盐性鉴定及转录组测序,克隆了苦荞麦FtNHX1和FtSOS1基因全长序列并进行了生物信息学分析,还对抗逆相关基因的表达量进行了研究,为植物拒盐分子机制的研究提供一定理论依据。 本研究主要内容包括:⑴测定了苦荞麦及其新株系的种子发芽率、幼苗质膜透性和Na+含量等生理指标,确定苦荞麦新株系的耐盐性更强;通过转录组测序对苦荞麦中的相关基因进行了功能注释与分析,并进行了差异表达基因的筛选。⑵通过同源克隆方法获得苦荞麦NHX基因,命名为FtNHX1,并在GenBank中注册,登录号KY438929;序列分析表明,该基因全长2052 bp,开放阅读框1662 bp,编码553个氨基酸,预测蛋白分子量61.24 kDa,等电点5.15。系统进化树分析表明,FtNHX1与其他植物液泡膜 Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系较近。随着 NaCl胁迫浓度增加, FtNHX1基因在苦荞麦根部、茎基部和叶片的相对表达量显著增加,150 mmol/L NaCl胁迫下增加幅度最大,分别比对照增加了254.10%、311.35%和256.18%;随着NaCl胁迫时间的增加,FtNHX1基因在苦荞麦地上部的表达量呈先增加后降低趋势,川荞1号和川荞1号-1茎基部FtNHX1基因分别在6 h和12 h达到最大表达量,叶片FtNHX1基因也分别在6 h和12 h达到最大表达量,说明苦荞麦FtNHX1基因明显受盐胁迫的诱导与调节。⑶通过RACE法获得苦荞麦SOS1基因,命名为FtSOS1,并在GenBank中注册,登录号KY659584;序列分析表明,该基因全长3873 bp,开放阅读框3396 bp,编码1131个氨基酸,预测蛋白分子量126 kDa,等电点6.57。系统进化树分析表明,FtSOS1与其他植物细胞质膜Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系较近。随着NaCl胁迫浓度增加,FtSOS1基因在苦荞麦根部、茎基部和叶片的相对表达量显著增加,150 mmol/L NaCl胁迫下增加幅度最大,分别比对照增加了304.10%、309.35%和260.08%;随着NaCl胁迫时间的增加,FtSOS1基因在苦荞麦地上部的表达量呈先增加后降低趋势,川荞1号和川荞1号-1茎基部FtSOS1基因均在6 h达到最大表达量,叶片FtSOS1基因分别在6h和12 h达到最大表达量,说明FtSOS1基因与苦荞麦的拒盐性有密切关系。⑷NaCl胁迫下,苦荞麦新株系川荞1号-1和川荞2号-1的SOD相关基因、POD相关基因及SR基因的表达量明显高于原有品种,这些基因表达量的显著增加对提高苦荞麦新株系抗逆性有重要作用。