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背景和目的:横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)是软组织常见的恶性肿瘤,可发生于任何年龄,恶性程度高,危害大。尽管目前恶性肿瘤治疗方法已有较大进展,RMS的疗效仍不理想,预后差。因此,探索RMS发生机理,积极开发新的抗RMS药物对RMS的防治具有重要意义。诺帝(Nordy)是新近根据去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiareticacid,NDGA)结构研制的手性化合物,研究发现,它对肺癌和恶性胶质瘤具有明显的抑制增殖、诱导分化、抗血管生成等作用,可能是一种具有很好应用潜力的新型抗肿瘤药物,但在软组织恶性肿瘤的治疗上有无效果以及相应机制尚不清楚。近些年发现,趋化因子受体CXCR4在恶性肿瘤生长、侵袭和转移中有重要作用,并可能是肿瘤治疗途径之一。本课题在研究人RMS趋化因子受体CXCR4表达的基础上,以RMS细胞PLA-802为模型,观测Nordy对PLA-802细胞及其异种移植瘤生长的影响及机制。材料和方法:研究对象采用24例人RMS临床标本和RMS细胞系PLA-802。PLA-802细胞及其裸鼠皮下移植瘤用Nordy处理。免疫组化检测RMS临床标本CXCR4表达。细胞计数法测定IC50和对瘤细胞生长曲线的影响,流式细胞术检测对瘤细胞细胞周期、凋亡的影响,光镜和电镜观察瘤细胞及移植瘤形态学变化,实时定量RT-PCR、Western blot、ELISA、免疫组织化学和图象分析分别检测对瘤细胞及移植瘤myosin、VEGF、CXCR4 mRNA和蛋白表达的影响以及对移植瘤微血管密度(MVD)的影响;采用48孔趋化板、激光共聚焦分别检测CXCR4对PLA-802细胞的趋化作用、细胞内Ca2+浓度的作用以及Nordy对其作用的影响。结果:第一部分:(1)Nordy对PLA-802细胞作用的IC50为69.23μmol/L;(2)50～200μmol/L Nordy对PLA-802细胞生长具有明显的抑制作用,且具有量-效和时-效关系;(3)100μmol/L Nordy处理后细胞形态变梭长,核质比降低,核及核仁变小;(4)100μmol/L Nordy处理24h后电镜见瘤细胞线粒体嵴紊乱、断裂,空化或形成髓鞘样结构,内质网扩张,粗面内质网脱颗粒;72h时细胞呈椭圆形或梭形,线粒体肿胀减轻,空化减少而髓鞘样结构增多,胞质内较易见到含量不等的肌(微)丝,偶见拟似凋亡小体;(5)100μmol/L Nordy处理PLA-802细胞后,12、24 h细胞周期G0/G1期分别增加15.1%和8.7%,48、72h G2/M期分别增加317.4%和137.2%,与对照组比较差异显著(P<0.05);(6)100μmol/L Nordy处理PLA-802细胞后12h即出现明显的细胞凋亡峰,并随作用时间的延长而增高,与对照组比较差异显著(P<0.05);(7)50～100μmol/L Nordy处理后瘤细胞myosin mRNA和蛋白表达增高,VEGF mRNA和蛋白表达降低,与对照组比较差异显著(P<0.05)。第二部分:(1)不同病理组织学类型RMS组织均存在CXCR4蛋白表达,腺泡性RMS CXCR4蛋白表达比胚胎性强(P<0.05);(2)RMS细胞CXCR4功能活性检测:1)10～100ng/ml SDF-1α能够诱导PLA-802细胞发生趋化运动且具量-效关系,达到最大迁移效果的浓度为100ng/ml;2)25～100ng/ml SDF-1α呈量-效关系引起PLA-802细胞内Ca2+浓度明显升高(P<0.05),其规律是加入SDF-1α后细胞内Ca2+浓度上升,至一定高度后再降低,细胞外存在或不存在钙离子的条件下反应均相同;(3)Nordy对PLA-802细胞CXCR4表达及功能活性的影响:1)50～100μmol/L Nordy能够抑制PLA802细胞CXCR4 mRNA和蛋白表达;2)50～100μmol/L Nordy对SDF-1α(50ng/ml)诱导的PLA-802细胞趋化运动具有抑制作用且具量-效关系;3)50～150μmol/L Nordy对SDF-1α(50ng/ml)引起的PLA-802细胞内Ca2+浓度升高具有抑制作用且具量-效关系,细胞外存在或不存在钙离子的条件下反应均相同。第三部分:(1)13.5mg/kg(45μmol/kg)及27mg/kg(90μmol/kg) Nordy治疗组移植瘤生长明显受抑制(P<0.05),抑瘤率分别为47.43%和60.02%;(2)Nordy治疗组无明显药物毒副作用;(3)Nordy治疗组瘤组织及细胞异型性变小,核分裂像减少;胞质内肌(微)丝增多;血管减少;(4)Nordy治疗组瘤组织myosin mRNA和蛋白表达增高,VEGF、CXCR4 mRNA和蛋白表达降低,与对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:Nordy对PLA-802细胞及其异种移植瘤生长具有抑制作用;其机制与促进凋亡、阻滞细胞周期、诱导分化、抑制CXCR4功能性表达和减少血管生成等有关。