人巨细胞病毒被膜蛋白行为与功能可视化研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gu999
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人巨细胞病毒(HCMV)是β疱疹病毒家族成员,与一系列疾病相关,在人群中的感染非常普遍。被膜是疱疹病毒科的病毒所特有,HCMV的被膜由三十多种病毒编码的蛋白质所构成。目前,对于HCMV的被膜及被膜蛋白的了解还极为有限。HCMV的被膜蛋白pp28对感染性HCMV病毒粒子的形成是必需的,但其在HCMV病毒粒子形成或被膜形成过程中如何起作用依然不清楚。本研究利用荧光共振能量转移(FRET)和酵母双杂交技术,发现HCMV的另一个被膜蛋白UL94在核周曾被称为病毒装配部位的地方与pp28发生特异相互作用,并进一步找出pp28的N端第22-43氨基酸是它与UL94相互作用的关键序列,而在UL94中不存在对结合起关键作用的线性序列。UL94与pp28的相互作用可能在HCMV的核衣壳形成,被膜形成,包膜形成这一系列连续的过程中起到一个桥梁的作用,为今后研究HCMV的被膜蛋白在病毒粒子的形成中的作用提供了可参考的资料。由于目前对UL94的研究比较少,UL94的一些相关性质和功能尚未被揭示。本研究利用荧光漂白恢复技术和荧光漂白损失技术发现UL94是一个能在细胞核和细胞质间进行穿梭的蛋白。通过观察UL94的多种缺失突变或点突变体在细胞中的定位情况,在UL94中发现两段核定位序列(NLS)和一段核输出序列(NES)以及一个对它入核有关键作用的位点(第343位氨基酸),这两个NLS同时也是核仁定位序列(NoLS),这些NLS(NoLS)和NES在以前文献中都未曾报道过。与其他富含亮氨酸的出核序列一样,LMB抑制实验结果表明UL94的NES是通过Crml途径出核的。进一步的实验还表明核质穿梭功能被破坏后的UL94不能包装进HCMV病毒粒子中。这些结果可以解析细胞内被膜蛋白的转运机制,揭示其动态行为在病毒感染中的功能。
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