【摘 要】
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目的:研究miRNA-27a-3p对人表皮黑色素细胞（Melanocytes,MC）形态变化、运动轨迹及速率、黑素合成相关基因的表达以及黑色素含量的影响。方法:取得成人的包皮组织后,将表真皮分离,再用胰酶消化成单个细胞后获取原代表皮细胞,使用差别胰酶消化法从原代表皮细胞中获得纯化的MC并进行培养。使用免疫荧光染色检测MC特异性标志物（糖蛋白100（gp100）、酪氨酸酶（Tyrosinase,TY
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目的:研究miRNA-27a-3p对人表皮黑色素细胞（Melanocytes,MC）形态变化、运动轨迹及速率、黑素合成相关基因的表达以及黑色素含量的影响。方法:取得成人的包皮组织后,将表真皮分离,再用胰酶消化成单个细胞后获取原代表皮细胞,使用差别胰酶消化法从原代表皮细胞中获得纯化的MC并进行培养。使用免疫荧光染色检测MC特异性标志物（糖蛋白100（gp100）、酪氨酸酶（Tyrosinase,TYR））的表达,从而对纯化后的MC进行鉴定。将MC接种到6孔板中,细胞密度达到50%左右时,使用miRNA-27a-3p的Mimic（过表达组）、Mimic-NC（Mimic的对照组）、Inhibitor（抑制组）、Inhibitor-NC（Inhibitor的对照组）对MC进行转染。转染后第1天,将细胞置于活细胞工作平台培养,每10min拍摄一次照片,连续拍摄12h,软件处理后获得转染后MC运动轨迹以及速率。转染后第2天,通过逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）测定 miRNA-27a-3p以及黑素合成相关基因的mRNA相对表达水平。转染后第4天,通过Western Blot检测黑素合成相关基因的蛋白表达水平。转染第5天时,利用NaOH法检测黑色素含量。结果:通过差别胰酶消化法获得了纯净的MC。通过检测转染后MC中miRNA-27a-3p的mRNA相对表达情况,发现Mimic组明显高于Mimic-NC组,Inhibitor组低于Inhibitor-NC组,即miRNA-27a-3p成功转染进了 MC。通过检测转染后MC的运动轨迹发现,Mimic组中MC的运动速率较慢,Mimic-NC、Inhibitor、Inhibitor-NC 3组无明显差异,即miRNA-27a-3p的过表达使得MC的运动速率受到了抑制。RT-PCR实验和Western Blot实验的结果表明了 miRNA-27a-3p的过表达能抑制黑素合成相关基因的表达,反之,miRNA-27a-3p Inhibitor组中黑素合成相关基因的表达升高。测定黑色素含量发现,Mimic组低于其他3组,即miRNA-27a-3p的过表达能降低MC的黑色素含量。结论:miRNA-27a-3p的过表达抑制人表皮MC的黑素合成相关基因的表达以及黑色素含量,而miRNA-27a-3p的降低能促进人表皮MC的黑素合成相关基因的表达以及黑色素含量。
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