目的 在非小细胞肺癌中,放射治疗抵抗降低患者生仔率,是NSCLC治疗的重要挑战。已有研究表明,自分泌会影响肿瘤的辐射敏感性,但在非小细胞肺癌中,自分泌物的主要作用目前尚不明确。本研究通过观察NSCLC细胞系(H460、H1299、A549)自分泌物对其辐射敏感性的影响,并从整体角度探寻自分泌因子增强细胞辐射抵抗作用的主要机制。方法采用人肺癌细胞系H460、H1299、A549体外培养作为研究对象,采用克隆形成实验联合Transwell共培养比较自分泌对非小细胞肺癌细胞(H460、H1299、A549)辐射敏感性的影响及293T细胞对非小细胞肺癌H460细胞辐射敏感性的影响;克隆形成实验比较自分泌条件培养基对H460细胞辐射敏感性的影响;MTT法观察条件培养基对照射后H460细胞增殖情况的影响;流式细胞术检测条件培养基对照射后H460细胞活性氧的表达情况和细胞周期的影响;qRT-PCR检测细胞内SOD1mRNA水平的变化,蛋白免疫印迹实验检测细胞内SOD1蛋白水平的变化;采用细胞免疫荧光法观察照射后H460细胞经条件培养基培养不同时间的γH2AX变化;蛋白免疫印迹实验检测H460细胞经条件培养基培养不同时间的γH2AX和DNA修复相关蛋白的变化;差速离心法收集H460细胞分泌的外泌体;蛋白免疫印迹和透射电镜验证外泌体;克隆形成实验检测外泌体对H460细胞辐射敏感性的影响。结果非小细胞肺癌细胞系H460、H1299细胞的自分泌因子能够增强自身的辐射抵抗作用;A549细胞系的自分泌物对其自身的辐射敏感性没有明显影响;293T细胞系的旁分泌作用对H460细胞的辐射敏感性无明显影响;自分泌促进照射后H460细胞的增殖作用、增加细胞内ROS的表达水平和DNA修复能力;照射后的H460出现明显的G2/M期细胞周期阻滞,同源重组修复能力明显增强,但自分泌外泌体对H460细胞的辐射敏感性无明显影响。结论非小细胞肺癌细胞能够通过自分泌作用增强DNA修复能力来提高自身的辐射抵抗作用。目的通过观察辐射抵抗型非小细胞肺癌H460R细胞分泌物对亲本H460细胞辐射敏感性的影响,探讨旁分泌在非小细胞肺癌辐射耐受能力传递中的作用及可能的机制。方法实验分为正常培养组,联合H460R条件培养基培养组,单纯照射组和照射联合H460R条件培养基培养组。克隆形成实验比较H460细胞和H460R细胞的辐射敏感性。利用克隆形成实验,,Tanswell和共培养实验观察H460R对H460细胞辐射敏感性的影响。免疫荧光实验检测H460R条件培养基对受照后H460细胞γH2AX foci形成的影响。流式细胞术检测H460R条件培养基对受照后H460细胞细胞周期变化。蛋白免疫印迹实验观察DNA损伤修复相关蛋白的表达情况。结果克隆形成实验显示H460与H460R细胞存在放射敏感性差异,H460细胞的放射敏感性高于H460R细胞。H460细胞在照射后经H460R条件培养基处理,其克隆形成率明显高于单纯照射组。免疫荧光实验证明H460细胞在4Gy照射后经H460R条件培养基培养,γH2AX阳性细胞数量与单纯照射组相比有所减少;流式细胞术检测结果表明在4Gy照射后经H460R条件培养基培养,H460细胞发生G2/M期阻滞,DNA修复能力增强。结论在肿瘤微环境中,辐射抗性的H460R细胞能够通过旁分泌增强H460细胞的辐射抵抗作用,这种作用可能与促进辐照后DNA修复能力有关。