肺间质纤维化是一种以进行性呼吸困难、干咳、气短、喘憋为临床特征的慢性进行性肺间质疾病。该疾病可由多种肺系疾病、多种系统性疾病发展而来,包括无原发疾病的特发性肺间质纤维化。其主要病理特征是成纤维细胞、肌成纤维细胞的增殖,细胞外基质的过度沉积。随着高分辨率CT的普及,肺间质纤维化检出率逐年升高。其发病率随年龄增长而增高,确诊后生存期一般为3-8年,中位生存期为3年。该病预后差,除肺移植外尚无有效的治疗方法,被世界卫生组织(WHO)列为难治性疾病。而近几十年来,中医凭借其成熟的辨证论治体系,在治疗肺纤维化一病的认识和治疗上积累了丰富的临床经验,取得了一定的较好疗效,值得肯定,但需要进一步循证医学的积累和实验研究数据支撑。因此,探索中医药治疗本病的有效性具有十分重大的意义。研究目的观察肺间质纤维化一病的临床中医证候特征,为深化中医对该病的认识提供一定的循证医学依据；通过动物模型实验和细胞学实验,观察导师经验方肺痹汤干预肺纤维化的疗效及其干预的可能机制。研究方法1肺纤维化中医临床证候特征研究的方法按照特发性肺间质纤维化与继发性肺间质纤维的诊断标准,制定临床信息采集表,观察2006年～2015年北京中医药大学第二临床医学院东方医院门诊收集的116例肺纤维化病人资料,对其症状进行整理分析,利用SPSS软件进行统计学上的聚类分析法,研究肺纤维化病人的中医证候学特征。2肺痹汤干预肺纤维化疗效机制研究的方法2.1实验一：观察肺痹汤在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型造模过程中的影响,设置假手术对照组、正常模型组、激素干预组和肺痹汤干预组,从小鼠一般情况、死亡情况、支气管肺泡灌洗液中白细胞计数、肺组织内胶原总含量等几个方面,探讨肺痹汤治疗肺纤维化的可能机制和疗效。2.2实验二：观察人甲壳酶蛋白(YKL-40)和干扰素-γ(INF-γ)对人肺胚成纤维细胞(MRC5)在小鼠脱细胞肺组织片(1nouse lung scaffold)上的生长情况及蛋白表达,从细胞水平探讨研究热点的细胞因子YKL-40对成纤维细胞增殖和蛋白表达的影响及其在肺纤维化过程中的可能作用。2.3实验三：观察不同浓度的中药单体黄芪甲苷、丹参酮Ⅱ A粉,中药注射液黄芪注射液、丹参酮ⅡA注射液,中药肺痹汤对MRC5的生长影响,从细胞水平探讨中药肺痹汤及其主要成份干预成纤维细胞增殖的影响。研究结果1肺间质纤维化的中医证候学研究1.1症状：肺间质纤维化患者常见的症状共计60项,出现频率超过25%的症状共有22项,依次为：咳嗽,气短,喘息,咳痰,乏力,口干,汗出,咽干,咳嗽无力,畏寒,失眠,心慌,易感冒,痰粘,恶风,痰难咯,大便干结,耳聋耳鸣,唇甲紫暗,头晕,腰膝酸软,盗汗。1.2证候要素：在中医证候要素方面,主要提示了“痰”、“气虚”、“热”、“阴虚”、“血瘀”是肺间质纤维化患者的主要证素特点。1.3证候分类：1.3.1气虚血瘀型。咳嗽,咳嗽无力,咳痰,白痰,乏力,淡暗舌。本组中“咳嗽”、“咳痰”为肺间质纤维化患者常见症状,“咳嗽无力”、“乏力”提示气虚的表现,“淡暗舌”提示气虚血瘀。此组症状提示气虚血瘀证的表现。1.3.2痰热阻肺型。痰粘,痰难咯,大便干结,脉滑。本组中痰粘、痰难咯提示痰热的表现,肺与大肠相表里,肺热移于大肠故可见“大便干结”,脉清提示痰证。本组症状为痰热阻肺证的表现。1.3.3气阴两虚型。喘息,气短,畏寒,汗出,心慌,易感冒,失眠,恶风,口干,咽干。此组中症状较多,提示为肺气阴两虚证的表现。1.3.4肾阴亏虚型。盗汗,头晕,耳聋耳鸣,腰膝酸软,脉沉,脉细。此组症状提示为肾阴虚证的表现。1.3.5痰瘀阻肺型。唇甲紫暗,暗红舌。“唇甲紫暗”与“暗红舌”主要为血瘀的表现。结合临床经验,提示此组为痰瘀阻肺证的表现。2肺痹汤干预肺纤维化机制的实验研究2.1肺痹汤对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型有缓解作用,可改善小鼠一般情况,降低小鼠肺内胶原蛋白总含量,减少肺泡支气管灌洗液内炎症细胞数量。2.2研究热点细胞因子YKL-40可以促进MRC5增殖,并能促使其向肌成纤维细胞转化；其免疫荧光染色结果显示YKL-40刺激的MRC5内,蛋白Ki67、I型胶原和a-肌动蛋白合成较对照组显著增多,使其更易在小鼠脱细胞肺组织片(mouse lung scaffold)上粘附生长增殖,从而促进肺纤维化的进程。2.3肺痹汤及其主要成份对MRC5增殖的抑制作用中药单体黄芪甲苷对MRC5的抑制作用随浓度的增加而增强,其中从0.078ug/ml开始出现抑制,其抑制率为3.06±6.52%,直至200ug/ml时抑制率为12.55±15.22%。中药单体丹参酮ⅡA对MRC5的抑制作用随浓度的增加而增强,其中从10ug/ml开始出现抑制,其抑制率为2.17±5.39%,直至160ug/ml时抑制率为72.62±12.29%.黄芪注射液对MRC5的抑制作用随浓度的增加而增强,其中从6.25×103ug/ml开始出现抑制,其抑制率为8.89±5.88%,直至10Sug/ml浓度时抑制率为20.58±9.5%。丹参酮Ⅱ A注射液对MRC5的抑制作用随浓度的增加而增强,其中从0.625ug/ml时开始出现抑制,其抑制率为11.32±10.35%,直至320ug/ml时抑制率为45.06±37.72%。肺痹汤对MRC5的抑制作用随浓度的增加而增强,其中从0.156ul/ml开始出现抑制,其抑制率为2.89±14.7%,直至2.5ul/ml及更高的浓度,抑制作用尤其明显,均在60%以上,其中2.5u1/ml的抑制率为66.2±34.75%。结论从116例肺纤维化病人资料临床观察分析结果,认为肺纤维化一病常见证候可能包括：气虚血瘀、痰热阻肺、气阴两虚、肾阴亏虚、痰瘀阻肺；其中医证候特征以气虚血瘀较为常见,气虚为其发病之本,血瘀为久病之实。肺痹汤能够缓解博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型的肺内情况,该疗效机制可能是从抑制炎症反应和抗胶原合成两个方面实现的。细胞因子YKL-40能够促进MRC5增殖,合成分泌胶原,并向肌成纤维细胞转化,是一种促肺纤维化的因子；而肺痹汤及其主要成份能够抑制MRC5的增殖,其中肺痹汤抑制效果最佳且多次重复实验的结果稳定,其主要成分丹参抑制效果亦可,且较黄芪的抑制效果好。在以肺纤维化常见证候气虚血瘀证基础上拟定的经验方肺痹汤,对肺纤维化有一定缓解作用,其作用机制可能是通过抑制成纤维细胞增殖,抑制肺内炎症反应程度和抑制胶原合成等几个方面。