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铬作为动物必需微量元素,添加入动物饲料中,对提高动物生产性能和肉品质质量有很大的潜力。铬的营养重要性已为人们所知,但是到目前为止,铬尚未被列入动物日粮添加剂中,这是由于对于动物日粮中是否有必要添加铬制剂尚存很大争议,铬的作用机制尚不清楚,特别是在细胞水平上的研究就更少报道,因此在细胞水平上研究铬对动物细胞的作用机制十分必要。我们希望通过本试验在细胞水平上研究不同剂量的铬对鸡胚成纤维细胞活力的影响,以期找出合适添加剂量并探讨其影响细胞活性的分子机制。本试验用9-11日龄的鸡胚制备鸡胚成纤维细胞(CEF),连传两代后,在第三代CEF的培养液中添加0、0.02、0.1、0.5、2.5、12.5和62.5μM等不同浓度的三氯化铬共同培养,通过MTT法、间接免疫荧光和流式细胞仪检测等方法检测不同时间、不同浓度的铬离子对细胞生长的影响。同时在三氯化铬与鸡胚成纤维细胞共同孵育48h后,采用流式细胞仪测定细胞线粒体膜电位、细胞内活性氧水平及细胞内钙离子水平,用比色法测定细胞内抗氧化酶活性、谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的含量。结果显示:0.02μM与0.5μM两个浓度在三个时间段(24h、48h和72h)与对照组相比细胞活性改变不显著,0.1μM组增殖活性显著高于对照组(P<0.05),其余各组细胞活性极显著低于对照组(P<0.01),且细胞活性的降低幅度与剂量呈正相关;除0.02μM与0.1μM两浓度外其余各浓度组细胞凋亡率极显著高于对照组(P<0.01),呈明显的剂量-效应关系。形态学观察可见,对照组及0.02μM与0.1μM两浓度组细胞形态正常、细胞排列紧密、细胞完整性良好,细胞核均匀着色;而高浓度组(0.5、2.5、12.5和62.5μM),随着三氯化铬浓度增加,细胞收缩、数目稀疏,核染色质凝聚、断裂,个别凋亡细胞核内出现凋亡小体,甚至核破碎。0.02μM与0.1μM浓度组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶活性较对照组提高或极显著提高(P<0.01);而高浓度组(0.5、2.5、12.5和62.5μM)细胞内SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化酶活性较对照组均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。0.02μM与0.1μM浓度组细胞内GSH含量较对照组极显著提高(P<0.01);而高浓度组(0.5、2.5、12.5和62.5μM)细胞内GSH含量较对照组均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。同时,0.02μM与0.1μM浓度组,细胞内MDA含量低于或极显著低于对照组(P<0.01);而高浓度组(0.5、2.5、12.5和62.5μM),细胞内MDA含量较对照组均增高或极显著增高(P<0.01)。流式细胞仪检测,0.02μM与0.1μM浓度组细胞内活性氧(ROS)水平和钙离子水平降低或极显著降低(P<0.01)而线粒体膜电位极显著升高(P<0.01);然而,高浓度组(0.5、2.5、12.5和62.5μM)细胞内活性氧水平极显著升高(P<0.01)、钙离子水平升高或极显著升高(P<0.01)而线粒体膜电位降低或极显著降低(P<0.01)。通过本试验,初步认为低剂量的三氯化铬(<0.5μM)对鸡胚成纤维细胞有促进或无害作用,但高剂量的三氯化铬(>0.5μM)对鸡胚成纤维细胞有毒害作用,并呈剂量-时间效应。三氯化铬在一定的有害浓度内对细胞产生氧化损伤,但到达一定浓度(>12.5μM)后对鸡胚成纤维细胞产生不可逆的损伤作用。三氯化铬浓度在高于0.5μM时,对鸡胚成纤维细胞的生长造成一定的负面影响。