中药成分CDP对直肠癌HCT-15细胞增殖的影响及其机制研究

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目的:研究中药成分CDP(二磷酸胞苷)对人直肠癌 HCT-15细胞增殖影响,并探讨其可能的机制。  方法:体外培养人直肠癌HCT-15细胞,MTT法(四甲基偶氮唑盐比色法)观察不同浓度中药成分 CDP(0、25、50、75、100、125 umol/L)处理(24h、48h、72h)后其增殖变化,倒置显微镜观察细胞形态学变化。流式细胞仪检测细胞周期。RT-PCR检测中药成分CDP对HCT-15细胞Sfrp2的mRNA的表达变化。Western blotting检测中药成分CDP对HCT-15细胞Sfrp2的蛋白表达变化。  结果:四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)结果分析表明中药成分 CDP能显著抑制HCT-15细胞分裂增殖,其抑制率随着药物浓度的升高而增强;随着时间的延长抑制效应无明显增强;倒置显微镜观察发现被中药成分CDP处理后的直肠癌HCT-15细胞密度呈剂量性减低,体积缩小、融为空泡、并且漂浮于培养基等细胞凋亡的形态学特征;用流式细胞术检测细胞周期观察到中药成分CDP将直肠癌HCT-15细胞阻滞在S期,呈现剂量依赖性。采用50、75、100 umol/L中药成分 CDP作用于直肠癌HCT-15细胞24h,RT-PCR检测Sfrp2的mRNA的表达逐渐增加,呈现剂量依赖性。采用50、75、100 umol/L中药成分 CDP作用于直肠癌HCT-15细胞24h,用Western blotting检测Sfrp2的蛋白表达量逐渐增加,呈现剂量依赖性。  结论:中药成分CDP能够抑制人直肠癌HCT-15细胞增殖,且呈剂量依赖性。中药成分CDP能将直肠癌HCT-15细胞阻滞在S期,呈现剂量依赖性。中药成分CDP能使Sfrp2的表达升高,且呈剂量依赖性。中药成分CDP可活化Sfrp2基因通过增强直肠癌HCT-15细胞内Sfrp2基因表达的机制来诱导其凋亡,关于CDP活化Sfrp2基因的具体分子生物学机制尚不清楚有待研究。
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