[背景]目前眼科医生对一些直接损害视网膜细胞的疾病,如青光眼、视网膜变性疾病等仍无有效的治疗办法,而视网膜干细胞的研究为治疗这些疾病带来了希望。视网膜干细胞的体外培养、增殖和分化的研究已经取得了一定的进展,但也存在着培养体系不统u一、增殖和分化机制不明确等问题。对视网膜干细胞的进一步深入研究可以为将来的临床应用创造条件。[目的]探索应用改良的方法培养大鼠视网膜干细胞,并比较不同年龄段大鼠视网膜干细胞增殖和分化能力的差异。[方法]使用含血清培养基直接培养的方法对取材于15日龄胚鼠、出生24h内大鼠和出生5d大鼠视网膜神经层的视网膜混合细胞进行培养和传代。使用免疫荧光染色和RT-PCR的方法研究视网膜干细胞的增殖和分化情况,并比较不同年龄段大鼠之间的差异。[结果]改良的培养方法成功地培养了大鼠视网膜干细胞并进行了传代。免疫荧光染色显示随着传代的进行,视网膜干细胞增殖并占据优势,同时逐渐向神经节细胞方向分化。RT-PCR显示随着传代的进行,15日龄胚鼠视网膜干细胞的Musashi和Nestin mRNA表达水平基本不变,Thy-1mRNA表达水平逐渐上升；出生24h内大鼠视网膜干细胞的Musashi mRNA表达水平基本不变,Nestin mRNA逐渐下降,Thy-1mRNA表达水平逐渐上升；出生5d大鼠视网膜干细胞的Musashi和Nestin mRNA表达水平逐渐下降, Thy-1mRNA表达水平逐渐上升。[结论]改良的培养方法对于培养和传代干细胞是稳定而可靠的,并可使视网膜干细胞向神经节细胞的方向分化。15日龄胚鼠的视网膜干细胞的增殖能力和保持未分化特性的能力最强；出生5d大鼠的视网膜干细胞向神经节细胞分化的能力最强。