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乙型肝炎是严重危害人类健康的病毒性传染病,也是各种病毒性肝炎中对人类危害最大的疾病。在我国,乙肝表面抗原（HBsAg）阳性者约1.2亿人,慢性乙型肝炎患者达3000多万人,给社会和家庭造成严重负担,已成为当今社会非常突出的重要问题。乙肝核心抗原（HBcAg）是乙肝病毒的核心部分,是判断乙肝病毒复制和病程活动的重要指标,但其检测所需的单克隆抗体主要依赖于国外进口,价格昂贵。本实验制备了含抗HBcAg单克隆抗体的小鼠腹水,考察了各因素对抗体制备的影响,并采用不同方法进行纯化,通过比较与优化,建立了良好的纯化HBcAg单抗方法,为其临床应用于乙肝患者的治疗和快速诊断奠定了基础,并为其它单克隆抗体的纯化提供了一定的参考价值。主要实验结果如下:1.弗氏不完全佐剂预处理的小鼠比石蜡预处理的小鼠腹水产量高:10～12周龄小鼠腹水产量高于6～8周龄小鼠;雌性小鼠腹水产量显著高于雄性小鼠腹水产量。腹水经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后抗体纯度大于硫酸铵沉淀法。2.样品以磷酸缓冲液(pH7.0,20 mmol/L PB+1.2 mol/L（NH4）2SO4对倍稀释后上样于HiTrap Octyl FF预装疏水层析柱,采用pH7.0,20 mmol/L PB+1.2 mol/L（NH4）2SO4～pH7.0,20 mmol/L PB+0 mol/L（NH4）2SO4,12CV梯度洗脱,然后依次用蒸馏水、0.5 mol/LNaOH、70%乙醇清洗介质,可获得纯度大于75%的mAb,抗体回收率达80%。3.样品以磷酸缓冲液（pH7.0,20 mmol/L PB+3 mol/L NaCl）对倍稀释后上样于HiTrap rProtein A FF预装亲和层析柱,pH3.0,0.1mol/LGIy-HCl一步洗脱,回收抗体的纯度大于95%,抗体回收率达75%。4.样品以磷酸缓冲液（pH8.0,20 mmol/L PB+0.5 mol/L NaCl）对倍稀释后上样于HisTrap HP预装金属螯合亲和层析柱（镍柱）,20mmol/L NaAC-HAC+0.5 mol/L NaCl（pH6.0、5.5、5.0、4.5、4.0）分步洗脱,可获得纯度大于85%的mAb,抗体回收率达80%。上述疏水作用层析法、蛋白A亲和层析法,金属螯合亲和层析法纯化后抗体的生物学活性均没有下降。