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迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）是一种重要的水产养殖病原菌,可引发海水鱼类患腹水病、败血症等,造成重大损失。本实验室从先期感染爱德华氏菌的大菱鲆上分离获得强毒株EIB202,并通过转录组学研究及其他筛选策略筛选出25个候选效应物。本文着重对其中4个效应物ETAE0866、ETAE1757、ETAE2186和ETAE2428进行了分泌和转运特性分析,并考察了它们在细菌黏附、内化及斑马鱼毒力方面的作用。首先,构建了表达效应物β-内酰胺酶融合蛋白的质粒,转入EIB202、ΔT3SS、ΔT6SS菌株中获得一系列重组菌株。利用胞外分泌蛋白免疫印迹分析、荧光能量共振转移（FRET）,鉴定出ETAE0866和ETAE1757依赖于三型分泌系统（T3SS）进行分泌转运,ETAE2186依赖于T3SS转运,而ETAE2428则依赖于六型分泌系统（T6SS）进行分泌和转运。利用免疫荧光技术和细胞质膜组分蛋白免疫印迹,发现ETAE0866和ETAE2428转运到细胞内后主要定位于细胞膜组分中,ETAE2186定位于细胞质组分中,而ETAE1757则可能定位于细胞核中。上述研究综合分析并确定了4个EIB202的效应物的分泌转运特性及胞内定位情况。其次,分别构建了上述效应物的单基因缺失株△0866、△1757、△2186和△2428并利用细胞模型比较了缺失株在细胞黏附、内化和增殖方面与野生株的差异。结果表明,△2428在非吞噬细胞感染模型上具有显著增强的黏附、内化的能力,同时△2428在巨噬细胞感染后期的增殖能力显著增强。随后,在斑马鱼模型上进行攻毒试验,发现△2428具有更好的减毒效果,表明ETAE2428在EIB202的毒力机制中扮演着非常重要的角色。最后,对上述4个效应物进行了表达和纯化,并成功获得ETAE2428纯化样品,为该效应物的结构和功能研究奠定了基础。上述工作对进一步探究迟缓爱德华氏菌T3SS和T6SS效应物的功能及其与宿主细胞之间的相互作用机制奠定了基础。