背景卵巢癌发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌,居于第三位,在妇科恶性肿瘤中最为致命,特点是隐性发病、迅速发展、病人临床治愈率低。毋庸置疑,卵巢癌已经对女性的健康造成了极大的威胁。遗憾的是,至今卵巢癌的诊治还没有理想的灵敏方法,以至于许多病人待发现时已丧失手术和治疗最佳时机,即使早期患者其复发率也高达40%。卵巢癌的治疗包括手术疗法、化学疗法、放射疗法和免疫疗法等,但正如上述所说,许多患者确诊时已达晚期并已明显转移,故而多采用保守疗法,其中化疗为最主要的非手术疗法。然而,由于目前的化疗药物靶向性不强而致疗效欠佳并有很强的毒副作用。综上所述,研发可用于靶向诊断和靶向治疗的分子元件是卵巢癌医疗实践面临的紧迫问题。而靶向多肽正是被寄予厚望的这类分子!噬菌体展示多肽文库(Phage displayed peptide library)的淘筛(Biopanning)是目前筛选靶向多肽最为有效的技术。从1985年提出以来,由于该技术本身的高效率筛选以及多肽分子本身具有的诸多优势已经广泛应用于生物医学各个领域的科学研究。多肽不仅分子量小、无毒、免疫原性低、易合成、具有高亲和力和敏感度等可作为靶向分子探针用于癌症的早期分子影像学诊断,而且可以与其他生物材料、纳米颗粒、抗癌药物等偶联形成靶向治疗药物,在提高药物疗效的同时也明显降低了药物的毒副作用,这对于卵巢癌的防治有着重大的意义。目的利用本室改良的Biopanning流程从噬菌体十二肽库筛选靶向人卵巢癌的肽段,并从细胞水平鉴定其特异性和敏感性,为未来进一步研发人卵巢癌特异性探针和靶向治疗药物奠定基础。方法利用噬菌体展示随机十二肽文库,以人卵巢癌细胞SKOV3为靶细胞,以人胚肾细胞HEK293为消减筛选的阴性吸附细胞,进行5轮全细胞消减筛选。随机挑取60个单克隆,扩增纯化后以ELISA初步筛选阳性噬菌体克隆,对阳性噬菌体进行测序,获得各克隆十二肽序,分析得到共有序列(consensus sequences),对共有肽序进行生物信息学分析软件后,利用细胞免疫荧光法以人卵巢癌细胞SKOV3、正常细胞、其他癌细胞进一步鉴定阳性克隆的靶向特异性和敏感性,最后获得最佳阳性克隆。结果1.经过5轮全消减细胞筛选,使得靶向卵巢癌细胞SKOV3的噬菌体得到了很大程度的富集。2.随机挑取的60个噬菌体单克隆,分别进行扩增、纯化。经ELISA初步鉴定,其中有44个可以作为阳性克隆,R20靶向性最强。3.对44个阳性克隆测序、分析后得到9条共有序列,分别为：AWPXXXXXXKAL、ASPXXXXXXVGP、QPTXXXXXXRSK、KLHXXXXXXSLI、 YDSXXXXXXPRA、KSGXXXXXXPNF、WSNXXXXXXTYG、ELIXXXXXXYLS和NIAXXXXXXGNR,分别命名为OSP1-OSP9。4.将9条肽序与数据库中已知蛋白质进行比较,发现它们与一些免疫球蛋白、肿瘤标记物、跨膜受体等某些活性结构域的同源性比较高。5.分析9条多肽的氨基酸组成和特点,共出现19种氨基酸,其中出现频率较高的有脯氨酸(P)、丙氨酸(A)、和丝氨酸(S),频率为12.96%、12.04%和9.26%。6.疏水性分析表明,疏水性多肽有3条,分别是OSP1、OSP7和OSP8,而其余为亲水性多肽。等电点分析显示酸性多肽有4条,分别是OSP2、OSP6、OSP7和OSP8,而其余为碱性多肽。7. ELISA和细胞免疫荧光实验均表明,R20克隆与卵巢癌细胞SKOV3靶向性最强,并且该克隆对人卵巢癌细胞具有很高的特异性和敏感性,与乳腺癌、宫颈癌、胃癌、肝癌、结直肠癌等其他癌细胞不结合,将其确定为最佳阳性克隆。结论利用噬菌体展示技术进行生物淘选,获得了靶向人卵巢癌细胞的最佳克隆/肽序：R20/OSP2。细胞水平的鉴定结果初步提示该靶向肽具有进一步研究开发为人卵巢癌靶向分子探针和靶向治疗药物导向元件的潜力。