建立成年兔关节软骨培养细胞观察碱性成纤维细胞生长因子的作用

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本实验研究的目的是利用建立的成年兔关节软骨细胞观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的作用,从细胞代谢DNA合成等方面进一步分析探讨bFGF对成年兔关节软骨细胞分裂、增殖的机制。其采用MTT法测定体外单层培养成年兔关节软骨细胞的增殖率;以10ng/ml的bFGF作用细胞2、4、6天,测DNA含量及基质中糖醛酸含量;同时,在10ng/mlbFGF作用下,采用流式细胞技术分析细胞周期亚时相和各期细胞的比例。实验结果显示:成年兔软骨细胞体外培养生长良好,培养两至三代时即可达到实验所需数量级,培养至第5代即有明显的“去分化”现象,细胞呈类成纤维细胞状;MTT结果显示bFGF促进成年兔培养软骨细胞的增殖;与对照组相比,bFGF组细胞DNA合成前期(G1期)和DNA合成后期及分裂期(G2M)的时间明显缩短;而DNA合成期(S期)却明显延长。成年兔培养软骨细胞也可能作为种子细胞,但出现“去分化”现象早于幼兔,应采用三代以前的细胞;bFGF可能通过改变成年兔关节软骨细胞的代谢,或改变细胞周期调控蛋白的合成促进细胞的分裂,可以作为建立成年兔软骨细胞的添加剂。
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