白头翁(Pulsatilla spp.)为毛莨科多年生草本药用植物,具有较高的药用价值及观赏价值,随着对其药理研究的不断深入,人们对白头翁需求量不断增加,致使野生资源受到了严重破坏,因此白头翁的归圃栽培越来越受到重视,在野生种质资源归圃的过程中,发现白头翁病害呈逐年加重的趋势,其中白头翁叶斑病(windflower leaf spot)发生普遍且危害严重,迄今国内外尚未见该病的系统研究报道。因此,本文针对白头翁叶斑病菌(Ascochyta anemones Kab.et Bub.)的种类鉴定、遗传多样性、致病机理、侵染特性及该病的流行规律进行了系统研究,主要研究结果如下：1.明确了白头翁叶斑病菌的分类地位。2010-2011年从采自沈阳农业大学百草园、抚顺市清源县英额门镇、抚顺市清原县夏家堡镇、抚顺市抚顺县马圈子乡白头翁人工栽培基地的白头翁叶斑病典型病叶进行分离,经柯赫氏法则证病,通过形态学及ITS序列分析,确定白头翁叶斑病的病原菌为银莲花壳二孢(Ascochyta anemones Kab.et Bub.)。2.首次在自然寄主上发现了白头翁叶斑病菌(Ascochyta anemones Kab.et Bub.)的有性态,并确认其有性态为亚隔孢壳属(Didymella)新种,定名为Didymella anemonessp·nOv.。3.首次从DNA分子水平上研究白头翁叶病斑菌遗传多样性。应用RAPD及ISSR两种分子标记手段,以采自辽宁省不同生态区的白头翁叶病斑菌菌株为研究对象,筛选出11条RAPD引物和8条ISSR引物,分别扩增出108条和95条谱带。采用NTSYS软件进行病原菌的聚类分析,结果表明：RAPD标记的30株供试菌株遗传相似系数在0.56～0.98之间,当遗传相似系数为0.622时,供试菌株被划分为4个类群；ISSR标记的30个供试菌株相似系数在0.58～1之间,当遗传相似系数为0.635时,供试菌株被划分为4个类群。RAPD及ISSR分析结果均表明辽宁省白头翁叶斑病菌具有丰富的遗传多样性,聚类组群与菌株的地理来源有一定的相关性,不同寄主来源的菌株之间存在明显的遗传差异。4.首次明确了白头翁叶斑病菌的致病机理。白头翁叶斑病菌能够产生一系列细胞壁降解酶,但其产生条件存在明显差异。静置培养利于各种细胞壁降解酶的产生；PG和PMG在培养6d时活性达到高峰,PGTE、PMTE、Cx和p-葡萄糖苷酶在培养12d时活性最高；PG和PMG产生的最适温度为25℃, PGTE、 PMTE、Cx和p-葡萄糖苷酶产生的最适温度为30℃；PG、PMG的活性在pH为5时最高。利用酸碱沉淀法提取了白头翁叶斑病菌黑色素,采用红外光谱研究了黑色素的性质。通过对黑色素的基本性质及其在致病性中的作用进行研究,初步证明白头翁叶斑病菌黑色素为DHN黑色素。采用RACE技术,获得白头翁叶斑病菌(Ascochyta anemones)黑色素合成过程中的聚酮合成酶AaPKS基因的cDNA序列,其全长为6278bp,(GenBank登录号为KC190500),最大开放阅读框(ORF)长5853bp,编码1950个氨基酸。预测该蛋白是由35.38%的a-螺旋(alpha helix)、14.21%的延伸链(extended strand)、4.15%的p-转角(beta turn)和46.26%的无规则卷曲(random coil)组成。序列比对和同源性分析表明,AaPKS基因与鹰嘴豆褐斑病菌(Ascochyta rabiei) PKS基因的氨基酸同源性最高,达95%。5.系统研究了白头翁叶斑病菌的侵染特性。研究结果表明：接种4h,病原菌即可萌发；接种12-24h,芽管不断伸长并在末端形成附着胞,附着胞大多在细胞间隙产生并直接侵入寄主角质层;一旦病原菌成功定殖,寄主组织便迅速瓦解；病原菌接种3-6d后,即可显症。寄主范围测定结果表明,白头翁叶斑病菌对草莓、苹果、番茄和辣椒均有致病性,其中对草莓致病性最强,发病率最高为80%。6.初步构建了白头翁叶斑病时间流行动态模型。2010-2011年对白头翁叶斑病病害发生情况进行了系统调查,应用SPSS软件进行回归分析,确认Logistic模型为最佳模型,并推导得出沈阳地区白头翁叶斑病指数增长期为5月末到6月中旬；逻辑斯蒂期为6月中旬到8月中旬；衰退期为8月中旬到白头翁生育后期。7.初步进行了白头翁叶斑病药剂防治研究。选用7种药剂对白头翁叶斑病菌进行室内药剂筛选,结果表明：25%嘧菌酯SC和40%氟硅唑EC对白头翁叶斑病菌的抑菌效果最好,EC5o值分别为3.1741mg/L和9.3088mg/Lo田间药剂试验结果表明：50%腐霉利可湿性粉剂对白头翁叶斑病的防效最高,达80.0%；40%嘧霉胺悬浮剂次之,防效可达78.0%;25%嘧菌酯悬浮剂对该病也有较好的防治效果。