【摘 要】
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目的:miR-129-5p在多种肿瘤组织和细胞株中的表达明显下降,观察在前列腺癌细胞中过表达miR-129-5p对其凋亡的影响并初步探讨其相关作用机制。方法:实时定量PCR(real-time PCR)检测前列腺癌细胞株DU145、LNcap与正常前列腺上皮细胞RWPE-1中miR-129-5p的表达差异。将DU145、LNcap细胞分为miR-129-5p mimics转染组和Negative
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目的:miR-129-5p在多种肿瘤组织和细胞株中的表达明显下降,观察在前列腺癌细胞中过表达miR-129-5p对其凋亡的影响并初步探讨其相关作用机制。方法:实时定量PCR(real-time PCR)检测前列腺癌细胞株DU145、LNcap与正常前列腺上皮细胞RWPE-1中miR-129-5p的表达差异。将DU145、LNcap细胞分为miR-129-5p mimics转染组和Negative control阴性对照组,并通过定量聚合酶链反应检测miR-129-5p在前列腺癌细胞株LNcap和DU145转染后表达效率。采用CCK8细胞增殖实验、平板克隆形成实验、诱导细胞凋亡实验分别检测miR-129-5p对LNcap和DU145细胞增殖、凝聚能力和凋亡能力的影响。通过生物信息学预测软件Targetscan、miRecords等预测miR-129-5p潜在靶基因。应用双荧光素酶报告基因实验检验miR-129-5p与潜在靶基因CDK6 3’UTR的结合能力;Western Blot检测潜在靶基因CDK6蛋白含量的表达。结果:前列腺癌细胞株DU145和LNcap中miR-129-5P表达是低于正常前列腺上皮细胞RWPE-1。miR-129-5p mimics转染前列腺癌细胞LNcap和DU145后miR-129-5p相对表达水平明显高于NC阴性对照组。外源性转染miR-129-5p使前列腺癌细胞凋亡能力增强,抑制其增值能力和凝聚能力。荧光素酶报告基因实验显示miR-129-5p和预测的靶基因CDK6之间有直接的结合位点,可靶向调控CDK6的转录活性。Western Blot实验结果表明,外源性miR-129-5p可以抑制CDK6蛋白的表达,进一步证明CDK6是miR-129-5p的靶基因。结论:上调miR-129-5p水平能够明显的促进前列腺癌细胞的凋亡能力和抑制前列腺癌细胞的增殖能力和凝聚能力,其机制与miR-129-5p抑制靶基因CDK6的表达有关,可作为前列腺癌治疗的潜在靶点。
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