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水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)作为重要的外源信号分子,已被证实可以诱导水稻的抗瘟性,但目前对于SA和MeJA所诱导的水稻抗瘟性的早期反应机制仍缺乏系统的了解和认识。细胞质膜作为细胞与外界环境的屏障,在感受及传递外界信号等过程中起着重要作用。近年来受到广泛关注的质膜蛋白质组学研究,为从亚细胞蛋白质组学角度了解SA和MeJA诱导的水稻抗病性机制提供了新的思路和技术平台。 本研究以近等基因系水稻C101LAC(含Pi-1抗稻瘟病基因)及其背景品系CO39(不含已知抗稻瘟病基因)为材料,用外源SA和MeJA处理水稻,经不同时间取样,通过细胞质膜的提取和纯化、双向电泳、图像分析、质谱鉴定等质膜蛋白质组学技术,对SA和MeJA诱导的水稻叶片质膜蛋白质差异表达进行了分析,拟为全面了解其诱导的水稻抗病性机制奠定基础。 1、用外源SA(0.1 mmol/L)处理以CO39为背景的近等基因系水稻,分别于8 h、12 h、24 h、48 h后取样,经质膜蛋白质提取、2-DE分离,获得了不同时间段的水稻叶片质膜蛋白质双向电泳图谱;用PDquest8.0软件对2-DE图谱进行图像分析,分别获得了27个和25个差异表达蛋白质;其中,在2个品系中均表现差异表达的相同蛋白质有17个。 2、用外源MeJA(0.1 mmol/L)处理以CO39为背景的近等基因系水稻,分别于8 h、12 h、24 h、48 h后取样,经水稻叶片质膜蛋白质提取、2-DE分离,获得了不同时间段的质膜蛋白质双向电泳图谱;用PDquest8.0软件对2-DE图谱进行图像分析,分别获得了24个和30个差异表达蛋白质。其中,在2个品系中均表现差异表达的相同蛋白质有11个。 3、采用MALDI-TOF-TOF质谱技术,成功对上述外源SA和MeJA诱导的35个和43个水稻叶片差异表达质膜蛋白质进行了鉴定。 4、经生物信息学分析,按照蛋白质功能,可将外源SA和MeJA诱导的差异表达质膜蛋白质分为4类:代谢相关蛋白质、信号转导和细胞运输相关蛋白质、膜转运相关蛋白质、功能未知蛋白质。对差异表达质膜蛋白质的功能进行分析,其主要参与了信号识别、信号跨膜转导、能量代谢、物质运输等生理过程,在水稻早期防卫反应中起着重要的作用。按照差异表达质膜蛋白质在不同水稻品系中的变化进行分析,SA和MeJA诱导的水稻抗性机制差异可能与抗性相关蛋白质在不同水稻品系中的种类差异有关、或同一差异表达质膜蛋白质的表达时间和表达量的差异有关。