【摘 要】
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目的:本研究通过观察“醒脑开窍”针刺法、补阳还五汤、“醒脑开窍”针刺法联合补阳还五汤对MCAO模型大鼠脑梗死面积比、脑组织内细胞凋亡相关因子的影响,并进行网络靶点拓扑学分析,探究针药并用相对于单纯针刺、中药治疗的优势及治疗脑梗死的可能机制。方法:采用随机分组方法进行实验分组。将250只SPF级SD大鼠（雌雄各半）随机分为假手术组50只、造模组200只。造模组参照大脑中动脉栓塞法（MCAO）进行模型
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目,课题名称:基于网络靶点效应拓扑学分析的针药并用治疗脑梗死机制研究,课题编号:81874507；
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目的:本研究通过观察“醒脑开窍”针刺法、补阳还五汤、“醒脑开窍”针刺法联合补阳还五汤对MCAO模型大鼠脑梗死面积比、脑组织内细胞凋亡相关因子的影响,并进行网络靶点拓扑学分析,探究针药并用相对于单纯针刺、中药治疗的优势及治疗脑梗死的可能机制。方法:采用随机分组方法进行实验分组。将250只SPF级SD大鼠（雌雄各半）随机分为假手术组50只、造模组200只。造模组参照大脑中动脉栓塞法（MCAO）进行模型制备,造模完成后,对大鼠进行行为学评分并将造模成功的动物随机分为模型组5 0只、针刺组50只、中药组50只、针药并用组50只,五组性别均为雌雄各半。假手术组、针药组行针刺及中药灌胃处理,针刺组行针刺处理,中药组行中药灌胃处理,模型组不做任何处理。针刺操作均为每次20min,每日2次,中药组只绑不针刺。中药灌胃每日1次,按0.6ml/100g给药。以上四组各分1d、3 d、5d、7d、14d五个时间点行取材处理,每个时间点每组随机取10只,随机抽4只用于检测脑组织梗死面积,随机抽6只用ELIS A法检测脑组织细胞坏死及凋亡相关因子（AIF、Bcl-2、Bax、C as pase-3、C HOP、F as、Fasl、p-Jnk、P53）的影响。并对ELISA试剂盒检测得出的9个靶点含量进行计算并构建靶点与靶点之间的相互网络关系。结果:1.脑梗死面积比:从整体数据看,针药组脑梗死面积比小于模型组、针刺组、中药组,差异有统计学意义（P＜0.05）;随着时间的延长脑梗死面积比逐渐缩小,术后14d时大鼠脑梗死面积比最小;术后1d、3d、5d、7d针药组与同一时间点的针刺组、中药组相比差异无统计学意义（P＞0.05）;术后14d针药组与针刺组、中药组、模型组差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.细胞凋亡相关指标的检测:（1）术后14d内,针药组较中药组,能显著下调凋亡相关因子B ax含量（P＜0.05）,针药组脑组织中AIF、Bcl-2、Caspase-3、CHOP、Fas、Fasl、p-Jnk、P53含量与针刺组、中药组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）术后随时间变化,针药组AIF、Bax、Caspase-3、Fas、Fasl、p-Jnk、P53指标呈现下降趋势。其中针药组脑组织内Fas、P53含量组内差异有统计学意义（P＜0.05）,Fas、P53随时间变化显示出明显下降趋势。针药组脑组织内AIF、Bax、Caspase-3、Fasl、p-Jnk含量,随时间变化组内差异无统计学意义（P＞0.05）。3.网络靶点拓扑学分析通过对ELIS A试剂盒检测得出的9个靶点含量进行计算并构建靶点与靶点之间的相互网络关系,发现Bcl-2的作用最强,其次为FAS,作用最小的为Caspas e-3。FAS作用系数最大,其余各靶点的作用系数均较离散。AIF、Bax、Bcl-2、CHOP、Fas、Fasl、p-Jnk、P53累计百分比大致相同,Caspase-3累计百分比较低。AIF、Bax、Fas为负向作用,其余6个靶点均为正向作用。靶点间网络关系中,正向作用关系最强的是BAX-FASL,负向作用关系最强的是CHOPP53。结论:1.“醒脑开窍”针刺法联合补阳还五汤可能通过抑制细胞凋亡缩小脑梗死面积比,疗效优于单纯“醒脑开窍”针刺法、补阳还五汤治疗;2.醒脑开窍针刺法联合补阳还五汤可能通过下调AIF、Bax/Bcl-2、Caspase-3、CHOP、Fas、Fasl、p-JNK、P53抑制脑梗死后细胞凋亡,其中Bcl-2、Fas、Bax可能为针药结合抑制细胞凋亡的关键靶点。3.结合脑梗死病理机制,发现各个靶点存在不同的介入针刺、中药治疗的关键时间段。4.结合网络拓扑学研究,靶点之间参数相关系数及特征值反映其在靶点网络中的不同地位和作用,9个靶点既有各自独立作用又相互联系。以上为将来针药并用治疗脑梗死的相关机制研究提供一定思路,为针灸现代化研究、新药开发提供一定基础。
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