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楝科植物巴西海木（Trichilia catigua A.Juss.）是主产于南美洲的一种小型灌木,作为巴西传统药物常用于缓解疲劳、压力和壮阳。以巴西海木为主要原料的保健品“Catuama”在巴西商业化应用已有20余年的历史。现代药理研究表明巴西海木具有显著的抗炎、抗菌及抗氧化作用。化学成分研究表明,巴西海木树皮的醇提物中可分离得到儿茶素类、绿原酸类以及苯丙酸类衍生物等多种酚类化合物。巴西海木在民间医学中广泛用于治疗阳痿等生殖系统疾病,而现代药理学研究目前主要集中在神经系统抗氧化作用,生殖系统相关作用及机制报道较少。本研究以邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）致雄性ICR小鼠生殖系统损伤为模型,研究巴西海木提取物（TCE）对于生殖系统损伤的保护作用及其作用机制,基于以上目的本课题开展了以下研究内容:第一部分:该部分采用水和不同比例（50%、70%及95%）乙醇溶液对巴西海木茎皮粉末进行粗提,醇提物依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,萃取分离得到4种粗提物（TCE-1～4）,9种有机相组分（TCE-5～13）;DPPH法评价各提取物自由基清除能力,测定结果显示各提取物均具备自由基清除活性,其中50%粗提乙酸乙酯组分（TCE-6）自由基清除效果最好;以TM4细胞增殖率为指标考察各提取物的细胞毒性作用,细胞毒性试验结果表明95%粗提物（TCE-4）,50%粗提石油醚组分（TCE-5）、正丁醇组分（TCE-7）,70%粗提石油醚组分（TCE-8）、正丁醇组分（TCE-10）以及95%粗提石油醚（TCE-11）、正丁醇组分（TCE-13）对TM4具有杀伤作用;采用H2O2处理TM4建立氧化损伤模型,以TM4存活率及氧化指标超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力变化为指标筛选抗TM4氧化损伤的提取物,结果显示50%粗提物（TCE-2）,TCE-6以及70%粗提乙酸乙酯组分（TCE-9）可显著提高氧化损伤后TM4细胞存活率,TCE-6可显著提高氧化指标SOD、GSH-Px活力、下调MDA含量。第二部分:该部分通过HPLC建立TCE-6指纹图谱色谱条件,对色谱条件进行方法学考察,结果显示该色谱条件精密度、重复性、稳定性试验RSD均＜2%,并确定、指认其中的儿茶素等4个酚类物质;标定9个共有峰对不同批次TCE-6样品进行指纹图谱相似度评价,结果显示6批次TCE-6样品指纹图谱的相似度均大于0.90;通过福林酚法测定不同批次TCE-6总酚含量,结果显示6批次TCE-6总酚含量在39.33-44.34mg GAE·g-1之间,总酚含量较为稳定。第三部分:本部分通过小鼠急性毒性试验对TCE-6安全性进行评价,急毒实验显示给予900 mg·kg-1 TCE-6不会引起小鼠毒性反应,TCE-6单日最大耐受剂量可达2.7 g·kg-1。建立DEHP（2.5 g·kg-1,7d）诱导雄性小鼠生殖损伤模型,以左卡尼汀（500 mg·kg-1）及VE（100 mg·kg-1）作为阳性对照,灌胃给予300、600、900 mg·kg-1 TCE-6 28天后,通过分析各组小鼠生理状态（体重、肛殖距、附睾及睾丸脏器系数、精子总数及畸形率）、病理变化（睾丸组织形态、血睾屏障（BTB）完整性）以及生化指标（血清性激素T、LH、FSH、E2）等的差异探究TCE-6抗生殖系统损伤作用,并通过检测氧化相关指标（SOD、GSH-Px、GSH、GR、MDA、CAT）及睾丸生精功能调控相关指标（睾丸标志酶AKP、ACP、LDH以及睾丸组织ATPase）初步探究作用机制,结果显示与对照组相比,DEHP可显著影响小鼠各项生理病理生化指标;H-TCE-6可恢复小鼠肛殖距及附睾脏器系数,显著下调精子畸形率、LH以及脂质过氧化产物MDA的含量,上调血清中T、FSH、E2水平以及Na+K+、Mg2+Ca2+-ATPase酶活力水平,也可较大程度恢复睾丸组织形态变化及BTB完整性;各剂量TCE-6均可显著提高SOD、GSH-Px和GR活性,GSH含量以及睾丸标志酶ACP水平,降低睾丸组织ROS及LDH水平。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测氧化、类固醇生成调控、细胞周期调控等相关基因的表达情况,通过免疫组化（IHC）检测相应蛋白表达情况,深入探究TCE-6抗生殖系统损伤作用靶点,结果显示DEHP可显著下调氧化通路相关基因（Nrf2、SOD2、SOD3）,细胞周期调控相关基因（CDC25C、CDK1）,类固醇生成调控相关基因（CYP11A1、3β-H）SD、5a-R、AR、SF1、CYP17A1,BTB紧密连接蛋白相关基因（Occludin、ZO-1）的mRNA表达水平,显著提高Keap1的mRNA表达水平,TCE-6可显著逆转以上基因的表达变化.IHC结果显示相关蛋白表达水平均有显著变化。综上所述,本论文可以得到以下结论:巴西海木提取物TCE-6的化学及生物模型均显示较好抗氧化损伤活性,有开发为生殖系统损伤治疗药物的潜力。TCE-6对于DEHP所致生殖损伤小鼠有明显改善作用,其生殖系统保护作用可能与调节氧化相关的Keap1-Nrf2途径、SODs酶的表达,细胞周期控制相关的CDC25C/CDK1途径的表达,类固醇生成相关途径相关酶活力以及BTB紧密连接相关蛋白的表达有关。