论文部分内容阅读
促性腺激素(GTH)、促性腺激素释放激素(GnRH)、生长激素(GH)及Ghrelin在哺乳动物的生殖调控中起着关键作用，其生理调控作用主要是通过与相应的受体FSHR、LHR、GnRHR、GHR结合来介导完成。因此，研究这些激素和受体在生后发育过程中垂体、卵巢内的表达与分布情况，是理解其在生殖发育调控中如何影响垂体-卵巢轴作用机理的基础。本试验以D0-D180日龄的雌性济宁青山羊为研究对象，采用免疫组织化学、RT-PCR和Western-blot方法研究从出生至性成熟(D0-D180)过程中垂体-卵巢轴中这些激素和受体表达定位以及mRNA表达规律，结果表明：D0-D180日龄血清中雌激素(E2)含量差异显著，孕激素变化趋势与E2相近，含量均以D0为多，D30显著下降，在D90和D180分别出现两个峰值，P是D120骤然上升。FSH在D0、D90有所升高；LH变化趋势基本同E2，在D90出现峰值。P的峰值出现是在LH之后，符合LH在促进排卵后，刺激P分泌的生理规律。而E2、FSH、LH含量在D90时处于高峰，可能是济宁青山羊发情早的原因之一。垂体内FSH、LH、Ghrelin、GnRH、GnRHR、GH、GHR、AR阳性细胞及其mRNA在D0-D180日龄山羊腺垂体内均有分布和表达，阳性细胞呈区域状分布，随着日龄增长阳性区域也增大。垂体细胞内GH、Ghrelin与LH分布特点和mRNA变化趋势相同，以D60显著高于其他月龄(p<0.05)，其次是D30、D90，提示在D30-90阶段垂体细胞通过大量合成分泌这些激素，调控垂体自身及卵巢等器官的功能活动，这可能是济宁青山羊性成熟早的物质基础。垂体和卵巢GnRHR、GHR、AR mRNA表达量在D60-D180间变化不大，提示受体含量在生后发育至性成熟阶段是相对恒定的，真正影响功能发挥的是取决于其相应激素含量和分布位置。在垂体和卵巢内有Ghrelin、GnRH免疫阳性细胞和mRNA表达，可能是源于垂体和卵巢对Ghrelin、GnRH的“需求”，并通过自身细胞以自分泌或旁分泌的方式来产生。AR阳性细胞的存在说明垂体和卵巢细胞也接受雄激素的调控，AR在垂体是D60阶段高表达，与绵羊相同；而AR在卵巢随着卵泡发育，在基质细胞和颗粒细胞内表达量增多。FSHR、LHR、Ghrelin、GHR阳性细胞在各月龄山羊的卵巢内分布位置因日龄不同而呈现较大差异。特别是在刚出生的D0阶段存在明显差异。在刚出生时集中分布在不规则原始卵泡的卵母细胞内，但随月龄增长，是在少数次级卵泡上存在，D30-180阶段常在1-2个生长卵泡上分布。当次级卵泡发生闭锁，则可在卵泡壁上见有环形排列的Ghrelin、GHR阳性细胞均匀分布。卵巢内动脉管壁的平滑肌上呈GHR、FSHR、LHR、GnRHR、GnRH阳性，而Ghrelin在动脉管壁周围的结缔组织呈强阳性。几种物质的mRNA表达量与组化结果变化趋势基本相近，结论：垂体内的FSH、LH、GH、Ghrelin、GnRH、GnRHR在生后发育过程中阳性细胞分布及mRNA表达量与生长阶段密切相关，几种激素可能协同调控垂体自身及卵巢等器官的功能活动。FSHR、LHR、Ghrelin、GnRHR、GHR在卵巢内分布的差异性说明其对于卵泡发育过程中调控随机体生长而异，其细胞内的mRNA是否表达相应的蛋白与卵泡发育相关联。垂体和卵巢还可以通过自身细胞以自分泌或旁分泌的方式产生Ghrelin、GnRH。