大豆异黄酮是大豆的次级代谢产物,主要有植物雌激素功能和抗氧化功能。有效成分主要有糖苷和苷元两类,糖苷类是其主要组分,苷元只占很少比例,但是苷元的生理活性远大于糖苷。因此,研究大豆异黄酮的水解具有重要意义。本实验室前期研究发现,Agrobacterium tumefaciens来源的游离型重组β-葡萄糖苷酶能够有效地水解大豆异黄酮糖苷为苷元。本文以降低大豆异黄酮水解成本、为工业化生产提供参考为目的,研究了重组β-葡萄糖苷酶的固定化条件、固定化酶的酶学特性及固定化β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的体系。主要研究内容包括：　　⑴通过培养工程菌株HCCB20097,纯化获得重组β-葡萄糖苷酶,并以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,采用交联.吸附的方法将其固定化,通过条件优化,确定固定化条件为:0.3g壳聚糖微球,2.5％戊二醛溶液10ml,25℃,150r/min振荡交联2h,蒸馏水洗去残余戊二醛,再加入pH6.0的柠檬酸.磷酸二氢钠缓冲液10ml,17.69U纯化的重组β-葡萄糖苷酶液,4℃,150r/min振荡吸附8h,酶活回收率达到56.12％。　　⑵考察了固定化β-葡萄糖苷酶及相应游离酶的酶学特性,确定固定化酶及游离酶的最适反应pH均为6.0,最适反应温度为40℃。固定化酶在不同pH或不同温度下的稳定性与游离酶相比,有明显改善。固定化酶在4℃、pH6.0条件下贮存近一个月,酶活仍能保持在90％以上,游离酶在相同条件下贮存3天酶活即降至40％以下。　　⑶将制备的固定化重组β-葡萄糖苷酶用于大豆异黄酮的水解,同时采用添加表面活性剂来克服产物得率低的问题。考察了不同表面活性剂对酶活及水解体系的影响,并对转化体系进行了优化,确定转化体系为:Triton x-114浓度1.5％,底物浓度1.0mg/l,固定化酶用量1.5U。固定化酶在此体系下重复使用11批次,底物水解率能保持90％左右,操作稳定性良好,转化效果略优于固定化市售p.葡萄糖苷酶。