松材线虫病发病植株细菌的分离鉴定及绿僵菌Mf2菌株杀线测定

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松材线虫病(Pine wood nematode disease, PWND)是国际上公认的重要性检疫病害,是松树上的一种毁灭性病害。目前人们对其病原以及致病机理做了大量研究,但仍没有确切定论。本研究拟通过分析松材线虫病感病植株与健康植株间微生物区系的差别,为揭示其致病机理寻找一个新的突破口。另外,探索测定了绿僵菌Mf2菌株对松材线虫的毒力,为利用绿僵菌作为生物农药防治松材线虫打下了基础。本研究以野外健康的和自然感病不足一个月的15年生马尾松为材料,利用组织分离法分离细菌,实验结果为:1、LB平板培养基培养组织块1d后,感病植株木块出现大量细菌,而健康植株未发现细菌。2、挑取细菌纯化培养,共获得12株菌株。提取细菌基因组DNA,利用分子鉴定的方法鉴定结果为杓兰果胶杆菌(Pectobacteriumcypripedii)、阿氏肠杆菌(Enterobacter asburiae)、肠杆菌属(Enterobacter.sp.)。金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae的寄主范围比较广,是当前研究和应用最多的虫生真菌之一。本研究从四种常见培养基PDA、PPDA、SDAY、SMAY中选择一种最适于绿僵菌Mf2菌株营养生长及产孢的培养基,测定了该菌株对松材线虫的毒杀活性。结果表明,Mf2菌株在PPDA培养基中生长速度最快,14d后菌落直径高于其他三种培养基,为76.00mm;培养14d后PPDA培养基中菌株产孢量最高,为5.667×1010个孢子,显著高于其他培养基上的产孢量,约为处于第二位的PDA培养基上产孢量的2.5倍;绿僵菌Mf2菌株具有较高杀线虫活性,处理36h后校正死亡率为98.52%,室温放置5d后线虫完全消解。利用绿僵菌Mf2菌株防治松材线虫具有良好的应用前景。
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