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猫疱疹病毒I型(Feline Herpesvirus 1),是α-疱疹病毒亚科,水泡病毒属的成员,主要引起猫的病毒性鼻气管炎。FHV-1只有一个血清型,且感染谱很窄,通常只感染猫科动物(包括虎、豹等)。临床上,FHV-1感染可引起为高热、食欲减退、流涎、出现眼鼻分泌物,严重的还会导致结膜炎甚至失明。与其他疱疹病毒类似,潜伏感染也是本病的一个典型特征,因此没有明显症状的病猫也是一个重要的潜在传染源。针对病毒感染,宿主细胞激活各种抗病毒防御机制来抑制病毒复制。虽然猫疱疹病毒1型(FHV-1)通过多种不同的方式调控宿主的早期先天免疫反应,但宿主可以通过未知的机制再次激活抗病毒反应来对抗病毒入侵。microRNA(miRNA)作为宿主的一类调节因子,可以参与调节宿主天然免疫应答来对抗病毒感染。为了探究miRNAs在FHV-1感染中的重要作用,我们利用Illumina高通量测序的方法对猫肾细胞系(CRFK)感染FHV-1前后的小RNA文库进行了测序。通过生物信息学分析首次发现了11个来源于FHV-1基因组的vmiRNA前体茎环结构,共编码19个vmiRNAs成熟体。与其他α-疱疹病毒相似,vmiRNAs在基因组上主要成簇分布,其中5条vmiRNAs位于基因组的LLT(潜伏相关转录文本)区域;还有7条vmiRNAs有两个拷贝,分别位于IRS区和TRS区,且分别由正反两条链编码。随后在病毒和宿主基因组中对vmiRNA的靶基因进行了预测和GO富集分析,结果表明,上述vmiRNA参与了代谢过程、生物调节、病毒复制、免疫应答等复杂的细胞过程,并与靶标基因构成了广泛的调控网络在FHV-1感染细胞和未感染细胞的文库中,分别鉴定了380和376个已知的宿主miRNA,并利用miRDeep2软件分别预测出55和50个新的宿主miRNA。此外,共有33个宿主miRNA在FHV-1感染后表现为显著差异表达,其中11个miRNA上调表达,22个miRNA下调表达。在差异表达的miRNA中,随机挑选了16个miRNA通过stem-loop RT-PCR进行验证,miRNA的表达水平与深度测序的结果基本相一致。根据高通量测序的结果选择了miR-26a和miR-101进行了深入研究。研究发现,FHV-1感染后miR-26a和miR-101的表达水平显著上调,两者均可以靶向SOCS5基因而增强Ⅰ型干扰素信号转导,进而抑制病毒复制。此外,鉴于SOCS5是miR-26a和miR-101的共同靶标,因此在FHV-1感染后表现为显著下调表达。SOCS5是JAK-STAT通路的一个负调控因子,敲除内源性的SOCS5增强了两者对I型IFN介导的抗病毒应答的作用,相反,SOCS5的过表达促进了FHV-1的复制,进一步研究表明,这是由于抑制了IFN-I诱导的信号级联反应所致。总之,本研究利用高通量测序分析了FHV-1感染前后miRNA表达谱的变化,首次发现了19条FHV-1编码的成熟vmiRNAs以及一些差异表达的猫源miRNA,其中miR-26a和miR-101可以靶向SOCS5基因而显著抑制FHV-1的复制,是由于抑制了IFN-I诱导的信号级联反应所致,表明宿主miRNAs可以通过增强IFN-I抗病毒信号通路来防御FHV-1感染。本研究填补了FHV-1miRNA研究的空白,揭示了miRNAs在FHV-1感染中的重要作用,同时为该病的防控提供了新的策略。