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为研究家蚕Fhx/P25基因在时空上的调控机制,通过PCR扩增获得家蚕丝素蛋白Fhx/P25基因的启动子序列并进行克隆和序列分析。进一步构建了由Fhx/P25启动子驱动报告基因DsRed的表达载体pSK-P25-DsRed-Poly,A,并通过家蚕BmN细胞进行瞬时表达。结果显示Fhx/P25基因的启动子序列符合真核生物启动子特点,具有丝腺特异性表达启动子的特征,TATA框的保守序列为TATAA,位于-28—32处,CAAT基序有3个,其中-110-117和-90-87处的2个CAAT基序可能具有活性;二级结构分析显示,Fhx/P25启动子区域具有复杂的茎环结构,可能与蛋白表达的组织特异性、时间性以及活性有关。基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕的BmN培养细胞中瞬时表达。
将家蚕丝素蛋白Fhx/P25启动子、人源胰岛素样生长因子(IGF-1)基因、家蚕丝素蛋白轻链基因Poly-(A)+加尾信号序列克隆到含增强子序列和新生霉素抗性基因(neu)的PigA3GFP中,构建转基因载体pigA3GFP-P25-IGF-PolyA-enhancer-neu,将此转基因载体进行了转家蚕BmN细胞研究,并通过精子介导法将此转基因载体与辅助质粒helper导入家蚕,获得了发绿色荧光的家蚕细胞和家蚕幼虫,为转基因家蚕及生物反应器的进一步研究做好准备。