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研究背景与目的：肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC,简称“肝癌”)是临床上最为常见的恶性肿瘤之一,其恶性程度高,难以早期发现,且预后极差,严重威胁着我国人民的健康。全身化疗是晚期HCC的重要治疗方法,传统细胞毒药物所带来的临床获益有限,而新型细胞毒药物如奥沙利铂(OXA)、吉西他滨(Gemcitabine, GEM)显示出一定的前景,但这类药物依然会遭遇获得性耐药而导致治疗失败。上皮间质样改变(Epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)是指上皮细胞转变成间质细胞并获得迁移侵袭能力的过程,该过程与肿瘤耐药密切相关,其中,血小板源生长因子-D(Platelet-derived growth factor-D, PDGF-D)在诱导EMT的发生过程中扮演关键角色。我们在前期的工作中,诱导建立了GEM耐药的肝癌耐药(GR)细胞(分别称为HepG2GR和SMMC-7721GR),与亲本细胞(HepG2和SMMC-7721)相比,发现耐药细胞可能发生了EMT形态改变,并发现PDGF-D在肝癌GEM耐药细胞中过度表达。本研究以耐药细胞为模型,考察PDGF-D是否通过EMT导致肝癌细胞获得耐药表型,以揭示肝癌细胞对GEM耐药的分子机制,为克服肝癌对GEM耐药提出理论依据和治疗策略。方法：1.制备肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的GEM耐药细胞：利用浓度梯度递增法建立了HepG2GR和SMMC-7721GR细胞,并用MTT法测定耐药水平。2.观察HepG2、HepG2GR细胞和SMMC-7721、 SMMC-7721GR细胞的形态；通过细胞划痕实验,迁移侵袭分析,Attachment、 Detachment实验考察耐药细胞的生物学活性；qRT-PCR、Western-Blot测定EMT分子标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail、Slug的表达。3.以qRT-PCR和Western-Blot测定肝癌亲本和耐药细胞中的PDGF-D及其受体PDGFRP的表达。4.以小干扰RNA (Small interfering RNA, siRNA)技术瞬时沉默耐药细胞中PDGF-D的表达,考察PDGF-D基因敲除对耐药细胞生物学行为和EMT表型分子的改变。结果：1.与亲代细胞相比,耐药细胞呈现出EMT形态学改变：细胞极性消失,伪足增多,呈拉长的不规则的成纤维细胞状；耐药细胞迁移侵袭能力增加,粘附脱附能力增强,具有较典型的EMT生物学特征；E-Cadherin等上皮表型分子表达显著下调,Vimentin、Snail和Slug等问质分子表达显著上调；2.肝癌耐药细胞PDGF-D和PDGFRβ的表达显著上调。3.干扰PDGF-D后,耐药细胞呈现出类圆形,很少有伪足形成；细胞迁移侵袭能力降低；E-Cadherin表达显著上调,Vimentin、Snail、Slug等间质标志物表达显著下调。结论：1.肝癌GEM获得性耐药细胞发生了EMT改变。2. PDGF-D参与肝癌GEM耐药细胞的EMT过程,抑制PDGF-D的表达,能逆转GEM耐药细胞的EMT改变。