目的:探索新的感应特定氨基酸信号的TORC1调控因子,完善对氨基酸介导的TORC1信号通路的认知。方法:通过生长实验观察不同氨基酸条件对TORC1活性的影响,从而确定筛选TORC1激活因子最明显的氨基酸条件;选取1:10（稀释10倍）和1:50（稀释50倍）两个稀释浓度对酵母全基因组缺失菌株进行高通量生长筛选;为了减少稀释误差引起的假阳性,也为了防止随机突变造成的克隆间差异,通过单克隆五倍梯度稀释生长实验进行进一步筛选;通过免疫印迹法检测核糖体蛋白Rps6的磷酸化水平,确认候选因子对TORC1活性的影响;通过基因上位性分析法检测候选因子与TORC1的相对位置;通过拯救实验确认潜在的TORC1上游激活因子;通过免疫印迹法检测并分析TORC1上游激活因子与Gtr1/2的相对位置关系。结果:通过生长实验确定CSH（Leu74）为筛选TORC1激活因子的氨基酸条件;通过酵母全基因组缺失文库进行第一轮筛选共得到336个生长缓慢的菌株;通过单克隆生长实验进行的第二轮筛选共得到122个生长缓慢的菌株;两轮免疫印迹法检测发现40个潜在的TORC1激活因子;给予CHX处理检测TORC1活性后共得到9个潜在的TORC1上游激活因子;分子克隆成功构建Loa1、Sto1、Spt4、Ost4、Cdc10、Meh1、Gsh2、Ilm1、Bck2表达载体,并转入相应缺失基因菌株当中;拯救实验包括生长和免疫印迹实验,其中生长实验发现Δloa1、Δsto1、Δspt4、Δost4、Δmeh1、Δbck2菌株中再表达相应的缺失基因后,生长不再受到抑制,而在Δcdc10、Δgsh2、Δilm1中表达相应的缺失基因生长不能恢复;免疫印迹法检测发现Δspt4、Δbck2、Δost4、Δmeh1菌株过表达相应的缺失基因后,TORC1活性都明显高于其对应的空载质粒菌株,而Δloa1、Δsto1、Δcdc10、Δilm1、Δgsh2菌株过表达相应的缺失基因后其TORC1活性并不能得到恢复;免疫印迹法检测发现,和转入空质粒的Δmeh1、Δost4菌株相比,表达Gtr1 Q65L突变体的Δmeh1、Δost4菌株中TORC1活性不变或降低;和转入空质粒的Δspt4、Δbck2菌株相比,表达Gtr1 Q65L突变体的Δspt4、Δbck2菌株中TORC1活性升高;表达Spt4、Ost4、Meh1、Bck2的Δgtr1菌株中TORC1活性明显升高。结论:Spt4、Ost4、Meh1（Ego1）、Bck2可能是潜在的TORC1上游激活因子。其中 Meh1（Ego1）、Ost4 在 Gtr1/2 下游促进 TORC1 活性,Spt4、Bck2 在 Gtr1/2 旁路促进TORC1活性。