前言 胆囊胆固醇结石是一种常见的消化系统疾病。目前的流行病学调查研究表明，胆固醇结石与家族遗传有关。胆石的形成可能源于复杂的环境作用和尚不明了的多基因作用。胆囊胆固醇结石症表现为胆汁中胆固醇的内环境的失衡，即胆固醇在胆汁中溶解的生理生化—平衡被打乱。胆汁中的磷脂，主要是卵磷脂在胆汁中与胆汁酸和胆固醇分子构成微胶粒，并和胆固醇组成微泡，它可以使微胶粒增大，提高胆盐携带胆固醇的能力，同时也可直接增加胆固醇在胆汁中的溶解，以防胆固醇结晶的析出而形成结石。因此，磷代谢的变化就可能成为胆石形成的危险因素。而目前的研究表明，MDR3与卵磷脂的分泌有关。本实验旨在通过应用RT-PCR的方法对胆囊胆醇结石病人与胆囊非胆固醇结石人的MDR3基因表达的对比来探讨MDR3在胆囊胆固醇结石形成中的作用。 实验材料 标本来源：实验组为2002年—2003年胆囊胆固醇结石患者的肝组织14例，收集的样本均为胆囊手术的病人术中行肝穿刺而得。对照组为非胆结石人的肝组织，其中1例为胆囊癌肝侵润患者的瘤旁正常的肝组织，1例为肝癌癌旁的正常肝组织，另3例为尸体的肝组织。待测标本均置于-70℃冰箱保存。 实验仪器：PCR扩增仪；低温离心机；匀浆机；电泳仪；无菌操作台；高压锅；恒温箱；紫外分光光度计；各种微量加样器；烤箱。 实验试剂：Trizol(invitrogen公司)，反转录试剂盒(promega公司)，Tag DNA聚合酶(华美公司)，dNTP(华美)，DNA marker(华美)，无水乙醇，异丙醇，DEPC，氯仿，Tris碱，EDTA，硼酸，蔗糖，溴酚蓝，浓硫酸，重错酸钾，TEMED，过硫酸铰，硝酸，硝酸银，福尔马林，碳酸钠，乙酸，甘油，丙烯酸胺，甲又双丙烯酸胺等试剂。 实验方法 1．组织总RNA提取 2．逆转录PCR 3．PCR反应及鉴定 4mRNA表达的半定量分析 结 果 胆囊结石患者的肝组织中MDR3 mRNA的表达比非胆囊结石的人的肝组织中的表达显著降低河＜0．01人 讨 论 多重耐药（ann）基因属于一大类v一糖蛋白（vP）超基因家族，大量的研究表明，MDR3（和他的小鼠的同源基因mdrZ）分布在肝脏的肝细胞膜的胆管侧上，MDR3 PgP是卵磷脂的跨膜转运子。本研究通过对胆固醇结石病人及非胆固醇结石人肝细胞的MDR3的mRNA表达的半定量分析发现，胆固醇结石病人的肝细胞的MDR3 mRNA的表达低于非胆固醇结石人群，提示MDR3 pgp在胆固醇结石形成中起到了一定的作用。由于MDR3 PgP是卵磷脂的跨膜转运子，如果人肝细胞中的MDR3 mRNA的表达降低将导致MDR3 PgP的减少，因此也就会导致卵磷脂分泌的减少。而卵磷脂是胆汁中的重要成分，卵磷脂在胆汁中与胆汁酸和胆固醇分子构成微胶粒，并和胆固醇组成微泡，它可以使微胶粒增大，提高胆盐携带胆固醇的能力，同时也可直接增加胆固醇在胆汁中的溶解，以防胆固醇结晶的析出而形成结石。胆汁中的卵磷脂的减少就会使胆汁中的胆固协卵磷脂的比值增加，使胆固醇的溶解减 ·2·少，从而为胆固醇结石的形成创造一个有利的环境。这同目前公认的胆汁中的胆固醇／卵磷脂的比值增高是胆固醇结石形成的一个重要因素的结论相一致。这与其他学者的研究结论相一致。胆固醇结石病人中肝细胞的MDR3 mRNA的减少的原因我认为可能有以下几个原因：第一，MDR3基因的变异。第二，MDR3基因调控的异常。由于本研究的样本较少，因此尚需要更多的研究来明确MDm与胆结石形成的详细关系。 结 论 一、胆囊胆固醇病人的MDR3 mRNA的表达降低。 二抓Dm在胆囊胆固醇结石的形成过程中起作用