激发标签技术是建立在功能获得突变基础上的一项突变体构建技术，它在分离和研究基因家族的基因、性状不易检测的基因以及性状由QTL(quantitativetraitloci)控制的基因等方面具有独特的优势。此外，激发标签技术得到的突变体通常为显性遗传，其突变的性状可在转基因的T1代表现出来，为目标突变体的筛选带来了很大的便利。拟南芥具有基因组小、结构简单、形体小、生长周期短、繁殖系数高、自花授粉等优点，且其基因组全序列测定工作已于2000年12月完成。其基因图谱的破译为我们提供了一个操作平台，为作物遗传工程的发展提供了一条全新的道路。因此，利用激发标签技术构建模式植物拟南芥的突变体库，从中筛选特异表型的突变体，克隆并研究相关基因的功能具有很大的成功可能性和良好的应用前景。 长期以来人们一直倾向使用生长素来解释植物的顶端优势，许多实验也支持这一学说，但是随着分子生物学的发展，很多与顶端优势相关的突变体和基因相继被发现与克隆。对这些基因及突变体进行研究将会为改良作物的农艺性状提供理论基础和科学依据。 以激发标签为基础的农杆菌介导的转化方法，转化效率一直在0.2％-1.5％左右，有时甚至更低，为了提高转化效率，我们进行了拟南芥转化条件的优化，为构建拟南芥突变体库提供了一个较理想的转化条件，利用本实验室已构建的突变体库，筛选到一株既有菌核病抗性又有特异表型的突变体，并进行了基因克隆和转化利用转化的突变体库筛选到兼有抗病的特异表型突变体，克隆基因并进行研究，取得了如下结果： 1.利用含激发标签质粒pSKI015的农杆菌直接转化拟南芥植株，以抗除草剂的Bar基因为筛选标记，通过不同光照、侵染液、粘附剂等条件的处理，发现在光照下用5％的蔗糖作为侵染液，0.02％的SilwettL-77作为表面活性剂，转化后经常喷水的条件下，转化效率最高，可以达到1.434％。 2.通过对突变体库的检测发现突变体库中并不是全部含有Enhancer，极有可能是因为摇菌次数过多引起的。 3.在筛选抗菌核病的突变体过程中，发现3号植株既具有菌核病抗性又具有特异表型——无顶端优势。 4.利用TAIL-PCR对筛选到的一批有菌核病抗性的突变体利用TAIL-PCR扩增T-DNA插入的侧翼序列进行了扩增。，并对其中感兴趣的突变体增强子附近基因进行了RT-PCR，比较了这些基因在突变体中的表达量变化，从而明确了增强子的插入对其边界基因表达的影响。 5.利用Gateway试剂盒克隆到At3g62690基因，并在野生型拟南芥Col-4中进行转化表达，进一步的结果还在验证中。 6.At3g62670基因尚在克隆中。本研究为构建拟南芥突变体库提供了一个较理想的转化条件，通过对突变体库的检测发现突变体库中并不是全部含有BAR和ENHANCER，极有可能是因为摇菌次数过多引起的。 利用本实验室已构建的突变体库，筛选到一株既有菌核病抗性又有特异表型的突变体，并进行了基因克隆和转化。