Genistein对多巴胺能神经元保护作用的体外实验研究

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第一部分Genistein对MPP+损伤的多巴胺能神经元及突触素的影响目的:探讨genistein(GST)对离体培养的帕金森病模型多巴胺能神经元以及突触素表达的影响。方法:取孕14~16天SD大鼠胚胎中脑腹侧,常规体外培养。将培养的中脑腹侧细胞分为四组:正常对照组、E2+MPP+组、GST+MPP+组、MPP+组。用TH和突触素(synaptophysin,SYN)免疫荧光染色,观察各组TH阳性神经元的生长状况以及突触素的表达:用MAP-2免疫荧光染色,观察各组神经元的生长状况。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力和代谢状态。结果:与正常对照组、E2+Mpp+组以及GST+Mpp+组相比,MPP+组TH阳性神经元数量少,SYN免疫活性产物表达亦减少,MAP-2阳性神经元减少,细胞活力差,差异有统计学意义。而E2+MPP+组、GST+MPP+组中上述指标与正常对照组相比,差异无统计学意义。结论:Genistein对体外培养的多巴胺能神经元具有类似雌激素样的神经保护作用。第二部分Tamoxinfen阻断雌激素受体后genistein对多巴胺能神经元及促凋亡蛋白bax表达的影响目的:探讨tamoxinfen(TAM,它莫西芬)阻断ER后,GST对离体培养的帕金森病模型多巴胺能神经元以及促凋亡蛋白bax表达的影响。方法:取孕14~16天SD大鼠胚胎中脑腹侧,常规体外培养。将培养的中脑腹侧细胞分为四组:正常对照组、GST+MPP+组、TAM+GST+MPP+组、MPP+组。用TH免疫细胞化学染色观察各组TH阳性神经元的生长状况。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力和代谢状态。用Western Blot观察各组bax蛋白的表达情况。结果:TAM+GST+MPP+组与正常对照组和GST+MPP+组相比,TH阳性神经元数量有所减少,突起长度变短,bax蛋白的表达量增加,差异有统计学意义。TAM+GST+MPP+组与正常对照组和GST+MPP+组相比,细胞活力差,差异有统计学意义。同时MPP+组与正常对照组,E2+MPP+组以及TAM+GST+MPP+组相比,TH阳性神经元数量减少,突起长度短,bax蛋白的表达量最多,细胞活力最差,差异均有统计学意义。结论:TAM具有部分下调GST对多巴胺能神经元保护作用的功能;GST在体外对多巴胺能神经元的保护作用除了通过ER发挥类雌激素样保护作用外,还可能经其他途径发挥保护作用;bax蛋白在神经元受损后表达增加,表明bax在多巴胺能神经元的凋亡过程中起重要的作用。
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