抗中间普氏菌卵黄抗体的制备及其对实验性妊娠期龈炎的预防作用

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目的制备并纯化抗中间普氏菌卵黄抗体(抗P.intermedia-Ig Y),观察其对大鼠实验性妊娠期龈炎的预防作用。方法厌氧培养P.intermedia菌,2%甲醛灭活,以终浓度为1 x 109 CFU/m L的P.intermedia菌,1 m L(0.5 m L菌液+0.5 m L佐剂)/次,免疫蛋鸡4次。用卵黄分离器去除蛋清,无菌注射器刺破卵黄膜,收集卵黄液,两步硫铵沉淀法纯化抗P.intermedia-Ig Y。SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot、ELISA对其分子量及特异性鉴定,并检测免疫后效价变化。将30只雌性SD大鼠(8-10周龄),15只雄性SD大鼠(8-10周龄),雌:雄=2:1合笼获得24只孕鼠,随机分为4组:0.12%氯己定孵育组(A),抗P.intermedia-Ig Y孵育组(B),生理盐水孵育组(C),空白组(D)。在造模期间,按分组情况接种经不同处理液孵育后的P.intermedia,1次/天,总共7次。通过检测各组之间牙龈指数(GI)、牙菌斑中P.intermedia含量差异及牙龈组织病理学检查,观察抗P.intermedia-Ig Y对实验性妊娠期龈炎的抑制作用。结果经4次免疫后抗体最高效价为1:512,000,维持45 d。1 g卵黄经两步硫铵沉淀后得Ig Y约18 mg。SDS-PAGE凝胶电泳显示纯化后Ig Y纯度达64.5%。Western blot显示抗P.intermedia-Ig Y识别并特异性结合P.intermedia菌裂解片段。动物实验观察见0.12%氯己定孵育组及抗P.intermedia-Ig Y孵育组牙龈指数(gingival index,GI)显著低于生理盐水孵育组(P<0.01),而两者之间GI无统计学差异(P>0.05)。牙龈组织病理学观察显示抗P.intermedia-Ig Y孵育组牙龈的炎症状态轻于生理盐水孵育组。结论经4次免疫后可得到持续高效价的抗P.intermedia-Ig Y,且抗P.intermedia-Ig Y能够减轻大鼠实验性妊娠期龈炎的炎症状态,对大鼠实验性妊娠期龈炎有一定的预防作用。
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