猴艾滋病模型被认为是最接近于人类AIDS的模型,病毒载量的检测在猴艾滋病模型运用中占有重要地位,我们运用猴艾滋病模型已有十余年,但一直没有建立自己的SIV病毒载量检测方法。随着本单位技术设备的进步,我们建立了自己的病毒载量检测技术。根据Genbank中搜索到的83条SIV全基因序列,对比后找出最保守的区域作为定量PCR扩增的靶区域,然后设计定量PCR引物探针,再设计一对包含定量PCR扩增靶区域的引物,上游引物连接T7启动子序列,扩增SIV病毒RNA,回收PCR产物后用T7RNA聚合酶合成SIVRNA标准品。然后用CEM×174细胞扩增的SIVmac251毒种作为SIV定量标准品,与体外合成的SIVRNA标准品进行对比,结果显示,SIV毒种和SIV体外合成RNA都可以作为定量PCR标准品,但SIV毒种在实用性方面更胜一筹。对SIV定量PCR的检测下限进行了探索,并对SIVTaqMan和Allglo探针进行了对比,结果显示,本实验所建立的SIV定量PCR检测方法的检测下限达50copies/ml,Allglo探针在SIV标准品最低检测浓度(50copies/ml)的重复性明显优于TaqMan探针。用TaqMan探针法和Allglo探针法分别检测了评价中药抗AIDS效果的猴艾滋病体内实验血浆标本的SIV病毒载量,并对这二种方法进行了对比,提出了复孔的差距与中位数的比值ω＜1作为判断复孔病毒载量检测是否可接受的理论,并应用于TaqMan探针法和Allglo探针法检测SIV病毒载量结果的对比,结果显示,总体上Allglo探针法的ω值要小于TaqMan探针法的ω值。本研究建立了敏感的SIV定量PCR检测方法,并提出了判断复孔检测结果是否准确的计算方法。为常规检测奠定了基础。