电针对家兔急性心肌缺血保护作用的内源性阿片肽机制研究

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目的:探讨“双固一通”针法对家兔急性心肌缺血(AMI)的保护作用及其内阿片肽系统的介导机制。方法:健康清洁级日本大耳白兔,随机分为四组:对照组(正常对照,不造模不针刺)、模型组(模型对照,只结扎左冠状动脉造模,不针刺)、电针组(结扎左冠状动脉造模,“双固一通”针法电针关元、足三里、内关穴位治疗),纳洛酮组(延髓头端腹外侧注射纳洛酮,结扎左冠状动脉造模,“双固一通”针法电针关元、足三里、内关穴位治疗)。实验动物用20%乌拉坦(5ml/kg)行耳缘静脉注射麻醉后,家兔于延髓腹外侧区头端(rVLM)中枢微量注射给药,结扎左冠状动脉前降支制造急性心肌缺血(AMI)模型,以“双固一通”针法电针刺激治疗。在实验中分别于中枢给药前,给药后(即结扎前)、结扎即刻、结扎后5min、15min、30min、45min、60min等时刻同步记录心电图、动脉血压,实验结束后取材。采用光镜和电镜观察心肌组织结构的变化,采用放射免疫测定法检测血浆、延髓、下丘脑等不同组织部位强啡肽、亮-脑啡肽、甲硫-脑啡肽的含量,采用免疫组织化学法检测延髓L-ENK免疫反应阳性细胞的表达,测定其阳性细胞表达率,采用原位杂交方法检测延髓前脑啡肽原mRNA的表达。结果:1.心电图:与正常组相比,模型组和电针组家兔心电图ST段电位显著抬高、T波高耸(P<0.01),与结扎前比较差异有显著改变(P<0.01),模型组ST段变化在冠脉结扎后15min时达到高峰,随后在整个观察期变化不明显,而“双固一通”针法电针组ST段电位、T波恢复较模型组有显著性差异(P<0.05),rVLM内微量注射纳洛酮对电针作用有阻断作用,能在一定程度上减弱电针的心肌缺血保护效应(P<0.05)。2.平均动脉血压:与正常组相比,模型组和电针组家兔动脉血压在造模后显著降低(P<0.01)。模型组血压的变化在冠脉结扎后15min时最为显著,随后动脉血压有所恢复,“双固一通”针法电针组血压恢复较快,在结扎后45min后就与最高峰有显著性差异(P<0.05),60min后血压与结扎前已无明显差异(P>0.05),rVLM内微量注射纳洛酮能减弱电针促进血压的恢复效应,使血压恢复时间延长(P<0.05)。3.血浆内阿片肽含量的检测:与正常对照组相比较,模型组家兔在结扎冠脉造成心肌缺血损伤后,血浆中强啡肽、亮-脑啡肽、甲硫-脑啡肽的含量均升高(P<0.01),“双固一通”针法电针治疗后,电针组家兔血浆内阿片肽含量较模型组明显升高(P<0.01)。4.脑组织内阿片肽的测定:结扎冠状动脉造模后,家兔延髓和下丘脑组织内三种阿片肽含量较正常对照组升高(P<0.01),电针组在“双固一通”针法治疗后,延髓和下丘脑内强啡肽、亮-脑啡肽、甲硫-脑啡肽的含量升高,与模型组比较具有显著性差异(P<0.01)。5.心肌组织学观察:光镜观察可见,模型组心肌排列稀疏,不规则,细胞水肿,心肌细胞出现明显空泡变性,部分心肌纤维断裂,细胞间隙增宽,可见较多的炎性细胞浸润。“双固一通”针法电针组心肌结构有明显好转,心肌细胞结构大致正常,纳洛酮能减弱电针的效应。6.心肌超微结构观察:电镜观察可见,模型组心肌细胞呈现缺血性损伤改变,心肌细胞肿胀,肌原纤维排列紊乱,肌原纤维断裂并可见闰盘处变性;线粒体明显肿胀,峭断裂;血管内皮细胞肿胀严重,吞饮小泡明显减少,电子密度不均匀,部分内皮细胞核与胞体分离。“双固一通”针法电针组心肌细胞超微结构结构大致正常,纳洛酮能减弱电针对缺血心肌的保护作用。7.延髓L-ENK神经元表达:延髓切片经免疫组织化学染色显示L-ENK免疫反应阳性细胞主要密集分布在背内侧的NTS至延髓VLM的带状区域,包括NTS与VLM之间的网状结构(RF)。心肌缺血模型组在延髓VLM部位L-ENK免疫反应阳性细胞显著增多(P<0.01),“双固一通”针法电针治疗后,电针组阳性细胞在延髓VLM的表达更多(P<0.01)。8.延髓PPEmRNA的表达:延髓PPEmRNA原位杂交显示,各组家兔内阿片肽基因表达部位也位于这些区域。结扎冠脉造模后,模型组在延髓VLM内可见PPEmRNA表达的细胞数增多(P<0.01),电针组在“双固一通”针法治疗后,PPEmRNA在延髓VLM内表达的细胞数明显高于模型组(P<0.01)。结论:1.“双固一通”针法能促进家兔AMI损伤时心电图ST段电位、T波的恢复,改善AMI时动脉血压的变化,对心肌缺血损伤的超微结构变化有较好的保护作用。2.“双固一通”针法改善AMI损伤与外周内阿片肽的参与有关,能促进血浆强啡肽和脑啡肽的释放,调整心肌细胞活动状态,实现心肌缺血损伤的保护作用。3.“双固一通”针法对缺血心肌的保护作用与中枢内阿片肽介导有关,电针刺激能促进延髓和下丘脑中枢阿片肽的释放,降低心肌组织损伤的程度。4.“双固一通”针法改善AMI损伤与rVLM内阿片系统的参与有关,rVLM内注射纳洛酮能减弱电针的作用,具有阻断效应。5.“双固一通”针法能促进延髓L-ENK免疫阳性神经元和PPEmRNA的表达,电针抗心肌缺血损伤作用与其促进肽能神经元的活动,加速脑啡肽基因表达的过程有关。
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