论文部分内容阅读
猪伪狂犬病是当前危害全球养殖业的主要疾病之一,给养猪业造成了巨大的经济损失。目前,在我国等一些发展中国家和地区,该病仍频繁发生,因此发展快速高灵敏的检测方法,对于猪伪狂犬病的早期诊断以及病情控制都具有重要的意义。采用量子点的信号放大免疫分析具有灵敏度高、检测范围广、特异性好、检测手段多样性等优势,在环境检测、生物分析、临床诊断等方面得到了广泛的应用。本论文针对基于CdSe量子点的荧光信号放大进行了研究并将其用于猪伪狂犬病的检测。论文围绕CdSe量子点探针以及CdSe功能化Si02微球探针的制备,结合量子点信号放大技术与猪伪狂犬病病毒(PRV)抗体免疫分析新方法的建立,开展了以下三个方面的工作:1.采用荧光染料罗丹明5N (Rhod-5N)检测CdSe量子点,阐述了该方法在生物分析及免疫检测中的应用前景以及其相比于传统检测手段的优势。实验优化了Rhod-5N检测CdSe量子点的条件,得出在最佳条件下,对CdSe量子点检测的线性范围为10.0到500pmol/L,检测的线性方程Y=0.1538+0.00134X,线性相关系数R2为0.9943,最低检测限为10.0pmol/L。采用该方法所检测的荧光信号强度为直接合成的油相CdSe量子点的45倍,为转水相之后的CdSe量子点的370倍。该方法对量子点本身的光学以及其它性能要求不高,因此目前的量子点合成技术完全可以满足需求。该方法为生物分析中量子点等标记物的检测提供了一种新的快速灵敏的检测途径,同时该方法还可以推广到对其它纳米材料标记物的检测。2.采用基于CdSe量子点离子置换反应的信号放大方法实现了对PRV抗体的灵敏检测。该方法利用CdSe量子点中含有的大量Cd2+进行免疫反应之后信号的放大。免疫反应之后通过Ag+置换出标记物CdSe中的Cd2+,最后采用Cd2+荧光指示剂Rhod-5N对释放出来的Cd2+进行检测从而间接的检测PRV抗体的含量。结果表明,在最优化的条件下,该方法对PRV抗体的检测可达阳性血清稀释1024倍,对PRV抗体的检测限约为1.22ng/mL。和传统的酶联免疫吸附法(ELISA)相比,该方法成本较低,检测线性范围较宽,灵敏度更高,特异性好,在临床分析和控制疾病传播方面显示出了良好的应用前景。3.合成了稳定的SiO2@QDs@SiO2微球并和兔抗猪IgG偶联制备探针,并将该探针用于PRV抗体的检测。实验采用Stober方法合成尺寸分布均匀的二氧化硅微球,对其表面巯基化后直接修饰油相CdSe量子点,将修饰之后的硅球进一步硅烷化,并进行环氧基修饰,合成Si02@QDs@SiO2微球。将SiO2@QDs@SiO2微球与兔抗猪IgG偶联制备探针并用于PRV抗体的检测,该探针利用硅球负载大量的CdSe量子点以及CdSe量子点中含有大量的Cd2+,达到信号双重放大的目的。利用该探针对PRV抗体进行了检测,检测结果表明该方法在一定程度上能够较好的用于PRV抗体的检测,提供了一种良好的可用于信号放大检测的功能化纳米材料。