萝卜过氧化物酶作用机理的初步研究

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心里美萝卜(Raphanus sativus L.)(肉质根白皮红肉),富含过氧化物酶[peroxidase,POD,EC1.11.1.7(X)]和花青素。本论文围绕外源萝卜过氧化物酶对心J里美萝卜幼苗期生长发育的调节及营养生长期心里美萝卜肉质根中天竺葵素含量和POD活性的动态变化、相互关系以及其他相关指标等进行了探讨。 主要研究结果如下: 外源萝卜过氧化物酶对心里美萝卜幼苗的苗高、根长及叶绿素含量无明显的影响,显著提高了不同部位的POD和过氧化氢酶(catalase,CAT,EC 1.11.1.6)活性及可溶性蛋白含量,降低了过氧化氢和天竺葵素的含量,提高了苯丙氨酸解氨酶(PAL,EC 4.3.1.5)在下胚轴中的活性而降低其在根中活性,诱导产生新的POD同工酶带并提高了子叶中POD Rsprx1的表达水平。辣根POD的作用总体上与萝卜POD相似,但不如萝卜POD作用显著,且作用时间较短。与活性萝卜POD相比,灭活后的萝卜POD的作用不明显,甚至具有一定的抑制作用。单独硝苯吡啶处理对萝卜幼苗的生长发育也有明显的影响。硝苯吡啶和萝卜POD的复合处理结果显示,质膜钙通道的阻断抑制了萝卜POD对CAT、PAL活性、天竺葵素和可溶性蛋白含量的调节作用,而对POD活性与过氧化氢含量影响不明显。结论:外源萝卜POD对心里美萝卜幼苗生长发育具有一定的调节作用,且该作用在一定程度上是通过质膜L-型钙通道影响细胞内的钙离子浓度来实现的。 随着营养期的延长,心里美萝卜肉质根的鲜重和直径逐渐增加,POD和PAL活性以及POD Rsprx1和Rsprx2基因相对表达水平均先升高后降低,CAT、α-淀粉酶活性和可溶性蛋白含量逐渐降低,而天竺葵素和过氧化氢含量则逐渐增加。POD和α-淀粉酶的同工酶呈现阶段差异表达。在营养生长期的同一阶段,韧皮部与木质部的各项指标均存在明显的差异。统计学相关分析表明:在营养生长期的早期,韧皮部和木质部中的天竺葵素含量与PAL活性均成明显正相关(韧皮部r=0.924**或木质部r=0.984**,p<0.01),与POD活性也呈明显正相关(r=0.998**,或r=0.992**,p<0.01);在晚期,木质部中的POD活性与天竺葵素含量成明显的负相关(r=-0.418**,p<0.05),与PAL和α-淀粉酶的活性均成明显的正相关(r=0.564**或r=0.860**,p<0.01),韧皮部中仅POD活性与α-淀粉酶的活性表现为明显的正相关(r=0.979**,p<0.01)。 结论:心里美萝卜肉质根中POD参与花青素的代谢,淀粉酶水解淀粉产生葡萄糖,糖代谢为花青素的产生提供碳骨架和氢供体,PAL和POD则参于花青素的合成和降解,其详细途径尤其是哪种过氧化物酶参与分解、哪种过氧化物酶参与合成有待进一步研究。
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