野菊花对牙龈卟啉单胞菌胰酶样蛋白酶活性的影响

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本实验以牙龈卟啉单胞菌作为研究对象,选用野菊花粗提物,研究野菊花对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)的生长是否有抑制作用,并探讨其对牙龈卟啉单胞菌胰酶样蛋白酶(trypsin-like protease,TLP)活性是否有影响及影响程度,为野菊花在临床应用治疗牙周炎提供理论依据。本实验以P.gATCC33277作为实验菌株,采用液体二倍稀释法进行药敏实验,测定野菊花对P.g的最小抑菌浓度(MIC);以此浓度为参考,配制牛心脑浸液培养基(BHI),加入不同浓度的野菊花粗提物和一定浊度的P.g菌悬液,野菊花粗提物中浓度分别为l/2MIC、l/4MIC和l/8MIC,P.g浓度为108CFU/ml,在37℃恒温条件下厌氧培养48小时,离心后收集培养物上清液,并将剩余菌细胞超声破碎,收集菌细胞破碎后上清液,测定培养物上清液和菌细胞破碎后上清液中TLP活性及蛋白含量,计算TLP的比活。结果显示野菊花粗提物对P.g的生长有明显的抑制作用,在P.g数量为108CFU/ml时,野菊花粗提物的MIC为1.25mg/ml。P.g的TLP存在两种形式:分泌到细胞外的游离态和与菌细胞结合的结合态,TLP主要以与菌细胞结合的结合态形式存在。P.g结合态TLP水解蛋白的能力比游离态强,其酶比活随野菊花粗提物浓度升高而降低。通过本实验可得到结论:野菊花粗提物对P.g的生长有抑制作用,对P.g结合态TLP活性有明显的抑制作用,高浓度的野菊花粗提物对P.g游离态TLP活性有明显抑制作用,但低浓度的野菊粗提物花对其抑制作用不明显。
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