β-1，4-D-甘露聚糖酶(endo-1，4-D-mannanase，EC3.2.1.78)是一种广泛应用于饲料和食品等行业中的半纤维素水解酶，具有重要经济价值。　　本研究将组成型产β-甘露聚糖酶毕赤酵母工程菌中的α-factor信号肽替换成五种新信号肽（W1、MF4I、INU1A、αpre、HFBI）。对比α-factor信号肽，W1、MF4I、αpre、HFBI信号肽改造菌株的相对酶活分别达到23.5％、203.5％、79.7％和120.3％，INU1A无胞外β-甘露聚糖酶活性。　　通过RT-PCR对β-甘露聚糖酶基因拷贝数进行测定的结果表明α-factor和MF4I两种重组子的MAN活力均于4个拷贝数时达到最大。替换MF4I信号肽的重组子在1-6个MAN基因拷贝数的水平上对比α-factor信号肽的重组子，提高的MAN活力分别达到66.30U/ml、90.56 U/ml、133.37 U/ml、173.97 U/ml、102.92 U/ml、102.26U/ml，相对酶活分别达到512.0％、209.0％、105.3％、100.2％、99.7％、105.2％。4个拷贝数的MF4I重组子MAN活力相对最大，可以达到347.5 U/ml。　　选用SMD1168作为表达宿主的重组子的平均酶活只能达到X33宿主型的62.7％-64.1％。而将pPICZα-MAN质粒中的α-factor进行MF4I信号肽改造，重新构建得到的诱导型pAOX1MF4I-MAN基因工程菌的酶活可以达到原来组成型pGAPZMF4IA-MAN基因工程菌中酶活最高水平的2.3倍，将其用于下一步高密度发酵。　　经单因素实验摸索发酵基础培养基氮源和碳源分别为27g/L的玉米浆干粉和20g/L的食品级葡萄糖，并在诱导流加培养基中新添加2g/L硫酸铵和0.5 g/L油酸。综合信号肽和启动子改造优化后的产β-甘露聚糖酶毕赤酵母工程菌经5L发酵罐高密度发酵后，产出的β-甘露聚糖酶最高活力从摇瓶的173.35 U/ml提高至6890 U/ml，总体提高幅度达到39.7倍。