目的 细胞内染色质含量的不平衡是引起肿瘤的根本原因，细胞遗传学上表现为染色体数目或结构异常，分子水平上表现为DNA片段的扩增、缺失、碱基改变等。目前资料表明，白血病病人有某些非随机的染色体畸变，这些染色体的异常与白血病的特殊临床表现，形态学和免疫学等特征相关，染色体畸变的分子生物学特征表明：基因在细胞的增殖和分化中起着重要作用，大量的研究显示，染色体改变对病人的诊断、治疗、预后及微小残留病变的检测都是非常重要的预测因素，因此恶性血性病的细胞遗传学研究具有重要的临床意义。 然而传统的细胞遗传学方法(Coventional Cytogenetics，CC)只能分析中期染色体，难以研究间期核、终未细胞和复杂的染色体结构，而且由于白血病细胞的低增殖性、中期分裂相质量不满意、不易获得足够量显带良好的分裂相、或有些染色体核型变化复杂或隐匿的染色体变化使其应用受到极大的限制。因此必定会有未知的染色体畸变或复杂型染色体易位不能用常规方法检出。 荧光原位杂交(Fluorescence in Situ Hybridizatiom，FISH)是近年来在细胞遗传学、分子生物学和免疫学技术相结合的基础上发展起来的一种新技术，它应用非放射性物质标记核酸探针，可以在染色体和间期核上对特定DNA序列进行定性、定量和定位研究。它克服了传统的细胞遗传学方法的不足，又避免了放射性原位杂交的一些弊病，在恶性血液病克隆分析，基因定位等方面发挥其巨大的优势。FISH的出现使细胞遗传学进入了一个“彩色”的时代。 ZI号染色体异常与恶性血液病发生机制的研究 许多恶性肿瘤有着复杂的染色体重排，这些重排的染色体被称为标记染色体（marker chro皿。m入传统的细胞遗传学方法是不能标记这些n诅rker chromosome的来源，而这些 marker chromosome的来源是恶性血液病发病的关键所在。目前国外对标记染色体起源的相关研究报到较少。在46条染色体核型中，21号染色体是最小的一个，且21号染色体在致白血病的发病机制中起很重要的作用，那么对于一些小的 markr cnromosome起源是否与ZI号染色体相关？ 基于以上原因，本研究以白血病病人为研究对象，采用分子生物学方法一荧光原位杂交技术r X涂沫FISH（whole chromo。me panitiflg）m用多种DNA探针（位点特异性DNA探针、特殊。卫星着丝点探针、涂抹探针，端粒点探针L对各种复杂的DNA序列进行杂交，从分子水平上对恶性血液病细胞遗传学的某些特殊变化、复杂的染色体重排及其来源进行探4讨。试图通过基因定位、基因扩增和缺失等变化，寻找可能潜在的癌基因或抗癌基因致白血病的机制，为白血病临床早期诊断、治疗、微小残留病变、预后提供理论依据。 材料与方法 1．病例选择 AL L病人共52例K995—2002X每一份标本均经过传统的细胞遗传学检查。前一B细胞型ALL44例，B细胞ALL7例，T细胞急淋1例。39例为儿童AJ－LK个月一14岁人其中36例为前一B型ALL，3例为B型ALL。男25例，女14例。13例为成人ALLa5—55岁人其中8例为前一B细胞型，4例为B细胞型，1例为T细胞型。成人ALL男6例，女7例。AML50例（1995—2002），成人37例（15—67岁），＊童13例（1一14岁），（MO：2例，MI：10例，MZ：11例，M3：9例，M4：7例，MS：10例，M6：二例）。MDS 23例，（RA：14例，RAS，2例，RAEB：3例，RAEB—t：4例人所有病例均经血象、骨髓相、免疫分型、细胞遗传学检查后而确诊。 2．实验方法 2．1染色体的制备：采用骨髓细胞短期培养法，骨髓培养24小时，终止培养前 2／J＼时加秋水仙碱，终浓度 0．ling／ml，常规收获细胞制片。常规制 ·2· 中文摘要备染色体，经G带处理后按国际细胞遗传学命名体制（ISC，1995）进行核型分析，每份标本检查20个分裂中期细胞。 2．2细胞：新鲜收获的细胞经固定后制成细胞悬液，直接滴于玻片上。保存于－20℃的细胞则先用新鲜冰冷的甲醇：冰醋酸D：门固定液反复冲洗2—4次后，再制成细胞悬液，滴于干净玻片上，置室温于燥。 2．3免疫原位荧光杂交吓ISH） 2．3．二预处理 ①将细胞标本载玻片放进ZXSSC溶液，在37℃水浴中至少20分钟。 ②将细胞标本取出放入新鲜配制的胰蛋白溶液中在37℃水浴13分钟。 ③把标本取出在常温依次浸在PBS一固定后溶液一PBS（硷酸盐缓冲液）各5分钟 ④空气干燥标本 ⑤将标本分别放于 70％石5％J00％乙醇溶液脱水各二分钟。 ③彻底空气干燥标本。 2．3．2变性 ①将标本放在变性溶液门5ml formamide＋sml 20XSSC PHS．3＋10ml纯水）在73℃水浴变性5分。 ②5分钟变性后将标本从变性液中取出并速迅放进 70％J5％J00％乙醇中，在常温下放置各1分钟。 ③将探针取出后在常温略放置一会，使探针达到常温温度后用加样器混合探