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金属硫蛋白是一类广泛存在于动物、植物、微生物体内,具有低分子量、高巯基含量,能大量结合重金属离子的活性蛋白质。 蛹虫草以15g·L-1Zn2+在10L发酵罐中诱导培养56h后收集,产率为每升发酵液收集12.021g菌丝体(干重);亚香棒蛹虫草以18g·L-1Zn2+在10L发酵罐中诱导培养64h后收集菌丝体,产率为每升发酵液收集12.164g菌丝体(干重);九州虫草以15g·L-1Zn2+在10L发酵罐中诱导培养56h后收集,产率为每升发酵液收集16.921g菌丝体(干重)。细胞破碎取上清液通过两次凝胶柱层析,冷冻干燥得到三种虫草金属硫蛋白纯品。利用考马斯亮蓝法(Bradford法)进行纯度鉴定,运用银饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT含量,利用Ellmans方法和火焰原子吸收法分别测得巯基含量和结合锌原子数,运用电喷雾质谱法测得分子量,利用全自动氨基酸分析仪测定氨基酸组成。 发酵终点处蛹虫草金属硫蛋白、亚香棒虫草金属硫蛋白、九州虫草金属硫蛋白的产量分别为12.876mg/g菌丝体(湿重)、15.335mg/g菌丝体湿重、14.335mg/g菌丝体(湿重),分子量分别为7390D、7680D、6500D,每分子蛋白质含巯基数分别为14个、18个、20个,每分子蛋白质结合Zn原子数分别为5个、4个、6个。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛹虫草金属硫蛋白共含57个氨基酸,其中含有13个半胱氨酸,疏水氨基酸占29.8%,且含有组氨酸;每分子亚香棒虫草金属硫蛋白共含60个氨基酸,其中含有15个半胱氨酸,疏水氨基酸占22.7%,且含有组氨酸和芳香族氨基酸;每分子九州虫草金属硫蛋白共含54个氨基酸,其中含有20个半胱氨酸,疏水氨基酸占19.6%,且含有1个组氨酸。 从半数清除率浓度来看,三种虫草总还原能力的大小:九州虫草金属硫蛋白>亚香棒虫草金属硫蛋白>蛹虫草金属硫蛋白;九州虫草Zn-MT与谷胱甘肽清除羟基自由基的能力相当,强于亚香棒Zn-MT和蛹虫草Zn-MT,而亚香棒Zn-MT强于蛹虫草Zn-MT;九州虫草Zn-MT对超氧阴离子自由基的清除能力是谷胱甘肽的1.3倍,亚香棒虫草Zn-MT的清除能力与谷胱甘肽相当,而蛹虫草Zn-MT的清除能力则较弱于前三者;亚香棒虫草Zn-MT、九州虫草Zn-MT与谷胱甘肽清除DPPH自由基的能力相当,蛹虫草Zn-MT清除DPPH自由基的能力较强。