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目的蛋白酶活化受体4(protease-activated receptor,PAR4),是蛋白酶活化受体家族成员之一,属于G蛋白偶联受体。研究发现PAR4在正常和炎症条件下参与调节疼痛反应,目前PAR4在痛觉调节中的作用机制尚不清楚,可能是经过细胞内的信号转导机制作用于周围感觉神经元,其中部分可能是通过致敏瞬时受体电位香草酸亚型1(Transient receptor potential vanilloid1TRPV1)参与外周伤害性刺激的调节。为了进一步了解PAR4在背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)初级感觉神经元的表达,及与伤害性感觉受体TRPV1的共存,探究PAR4在外周伤害性感觉信号传导中的作用提供形态学依据。方法1.应用免疫荧光组织化学双标法结合激光共聚焦显微镜技术,观察PAR4在大鼠和小鼠DRG初级感觉神经元的表达及与TRPV1的共存。2.腹腔内注射醋酸建立内脏疼痛大鼠动物模型,应用免疫荧光组织化学双标法结合激光共聚焦显微镜技术,观察PAR4在DRG初级感觉神经元的表达变化。结果1. PAR4在小鼠DRG初级感觉神经元的表达及与TRPV1的共存:免疫荧光显示小鼠DRG内见有大量的感觉神经元表达PAR4,其形态多为中、小型的圆形、卵圆形,以及少量的大型神经元,可见少部分阳性神经元纤维。有80.5%±3.1%(3672/4558)神经元表达PAR4。免疫荧光双标法显示DRG内可见较多的TRPV1阳性神经元,均为中、小型感觉神经元胞体,许多DRG的PAR4阳性神经元的表达均与TRPV1的共存,有76.9%±3.4%(2826/3672)的PAR4阳性神经元表达TRPV1,有77.4%±3.1%(2826/3647)的TRPV1阳性神经元表达PAR4。2. PAR4在大鼠DRG初级感觉神经元的表达及与TRPV1的共存:PAR4在大鼠的DRG内的表达与小鼠类似,同样见有大量的感觉神经元表达PAR4,其形态多为中小型的圆形、卵圆形,以及少量的大型神经元,细胞计数显示:有85.4%±4.1%(4337/5078)神经元表达PAR4。免疫荧光双标法显示有83.5%±3.6%(3623/4337)的PAR4阳性神经元表达TRPV1,有88.3%±3.5%(3623/4102)的TRPV1阳性神经元表达PAR4。3.PAR4与CGRP在大鼠DRG初级感觉神经元的共存:免疫荧光显示大鼠DRG内见有大量的感觉神经元呈CGRP阳性,其形态多为中、小型的圆形、卵圆形,以及少量的大型神经元,并观察到部分CGRP阳性神经纤维,有75.6%±4.1%(3387/4478)阳性神经元表达CGRP。免疫荧光双标法显示有82.3%±4.6%(2788/3387)PAR4阳性神经元表达CGRP,有64.2%±3.7%(2788/4337)CGRP阳性细胞均表达PAR4。4. TRPV1与CGRP在大鼠DRG初级感觉神经元的共存:DRG内TRPV1阳性神经元与CGRP阳性细胞类似,均为中、小型感觉神经元胞体和一些弥散神经纤维。免疫荧光双标显示TRPV1/CGRP在DRG感觉神经元内广泛的共存,有83.9%±3.6%(2842/3387)CGRP阳性细胞均表达TRPV1,有69.2%±3.2%(2842/4102)TRPV1阳性细胞表达CGRP,也可观察到少量的TRPV1单标神经元或CGRP单标神经元。5. PAR4在内脏疼痛大鼠动物模型中DRG感觉神经元的表达变化,在内脏疼痛大鼠动物模型DRG内PAR4阳性感觉神经元的数量明显增加,细胞计数显示PAR4阳性感觉神经元的数量与正常大鼠相比,增长了11.1%±2.3%,有96.5%±4.3%(5336/5528)神经元表达PAR4。同时DRG内TRPV1阳性神经元的数量也明显增加,有95.0%±4.4%(5110/5378)神经元表达TRPV1。免疫荧光双标显示有较多的PAR4/TRPV1双标细胞,分别占PAR4阳性和TRPV1阳性细胞的88.8%±3.7%(4742/5336)和92.7%±3.4%(4742/5110)。实验结果显示在大鼠DRG内见有许多感觉神经元表达PAR4,并与TRPV1广泛的共存。结论1.PAR4在大鼠和小鼠的DRG初级感觉神经元有广泛的表达,主要为中、小型神经元。2.PAR4与TRPV1在DRG初级感觉神经元存在广泛的共存,说明PAR4参与外周伤害性刺激可能与TRPV1的功能调节有关。3.在内脏疼痛大鼠动物模型中,PAR4在DRG的表达明显增加,说明PAR4在内脏伤害性刺激的传导过程具有重要的作用。