中药自身的特点决定了其体内代谢过程的特殊性与复杂性。微透析技术能够实现原位、在体取样,实时反映游离药物在体内的分布及代谢消除情况,在中药体内分析领域具有巨大的应用潜力。由于目前微透析系统及探针进口自少数国外厂家,探针价格昂贵且使用次数有限,极大提高了该技术的使用成本。本文以实验验证自制微透析探针使用性能为起点,在确保自制探针稳定可靠的基础上,采用微透析取样技术,对中药葛根有效成分葛根素的游离型药物分子在大鼠体内的经时变化过程、组织分布以及磷酸糖蛋白在药物吸收过程中的影响进行了初步探讨。主要研究内容及结果包括以下几个方面:(1)以自制微透析探针为研究对象,通过体外芍药苷微透析实验,评估灌注液流速、人工细胞外液中药物浓度、回收率测定方法及半透膜性质对自制同轴型微透析探针取样回收率的影响。实验结果表明:自制探针的回收率随灌注液流速升高呈近似指数曲线降低;当灌注流速为8.0μL/min时,回收率表现出浓度依赖性;采用直接透析法或反向透析法所得同一探针回收率存在一定偏差;回收率因探针不同而存在差异;探针在体内连续取样6h,半透膜的通量未见衰减。实验室自制探针性能稳定,可用于体内微透析研究。(2)基于葛根素在碱性条件下具有荧光这一天然属性,采用了高效液相色谱-柱后修饰荧光检测器联用的分析方法,对取自大鼠颈静脉和肝脏的透析液中游离态葛根素浓度进行连续测定。该分析方法中葛根素的检测限为0.0014μg/mL(S/N=3)。同轴以及线型探针植入体内之前以及取样完毕取出之后,分别进行体外回收率测定,结果表明两种探针在体内取样过程中,半透膜通量未发生变化。同轴及线型探针经反透析法测定的体内回收率分别为(11.4±2.09)%和(12.7±3.15)%。大鼠股静脉注射葛根素30 mg/kg后,游离态葛根素快速分布于肝脏组织中,并且在随后的消除过程中肝脏与血液表现出相似的消除趋势。(3)中药多以口服的方式进入体内,肠道是其代谢处置的重要部位,其上广泛分布的磷酸糖蛋白对某些药物的代谢过程具有重要影响。通过设计对照组实验,采用微透析技术比较研究磷酸糖蛋白抑制剂维拉帕米对体内游离态葛根素药动学行为的影响。结果显示,联合给予维拉帕米后,游离态葛根素的达峰浓度大幅提高(p＜0.05);AUC值为单独给予葛根提取物组的2.11倍。表明维拉帕米有可能通过抑制肠道的磷酸糖蛋白和CYP3A4酶,一方面减弱磷酸糖蛋白的外排作用,另一方面减少CYP3A4酶对葛根素的代谢,从而减少首过效应,增加葛根素的吸收,提高其生物利用度。实验数据还显示,游离态葛根素在两组实验动物体内的清除率无明显变化(p＞0.05);虽然游离态葛根素在两组动物体内的平均驻留时间MRT均值相差较大,但经t检验后未见显著性差异(p＞0.05),据此初步推测维拉帕米与葛根素的相互作用主要发生在肠道吸收过程。